小反芻獸疫(Peste des petits ruminants,PPR)是由小反芻獸疫病毒(Peste des Petits Ruminants virus,PPRV)引起的一種急性、烈性和高度接觸性傳染病。PPR主要侵害綿羊、山羊等小反芻動(dòng)物,以口炎、肺炎和發(fā)熱為主要特征,該病嚴(yán)重阻礙了羊養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。外泌體(exosomes)是一類介導(dǎo)細(xì)胞間通訊的納米級(jí)囊泡,可通過(guò)其載荷的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等物質(zhì)調(diào)節(jié)攝取這些外泌體的細(xì)胞的生物學(xué)活性。近年研究表明,外泌體介導(dǎo)的病毒逃逸或宿主免疫系統(tǒng)抑制可能是病毒傳播以及致病的一條關(guān)鍵途徑。我們的前期研究證明,PPRV感染引起山羊外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)外泌體釋放水平上升,提示外泌體在PPRV在細(xì)胞間傳播中發(fā)揮作用。本研究旨在揭示PPRV感染誘導(dǎo)的外泌體在病毒傳播中的作用及其機(jī)制,研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1. 將PPRV疫苗弱毒(N75/1株)感染非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)及山羊PBMCs后收集上清,通過(guò)低速離心除去死細(xì)胞、細(xì)胞成分和細(xì)胞碎片后,結(jié)合過(guò)濾技術(shù)除去游離的病毒粒子,超高速離心沉淀外泌體,最后用外泌體提取試劑盒富集純化外泌體。通過(guò)納米粒...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
文獻(xiàn)綜述
    第一章 小反芻獸疫病毒和外泌體研究進(jìn)展
        1.1 小反芻獸疫病毒(PPRV)研究進(jìn)展
            1.1.1 PPRV的病原學(xué)特征
            1.1.2 PPRV的防治現(xiàn)狀
            1.1.3 PPRV的致病機(jī)制
        1.2 外泌體的生物學(xué)特性以及其在病毒傳播中的作用
            1.2.1 外泌體形成過(guò)程
            1.2.2 外泌體的組分及各組分的生物學(xué)功能
            1.2.3 外泌體的分離及鑒定
            1.2.4 外泌體在病毒傳播中的作用
        1.3 細(xì)胞自噬在外泌體分泌中的作用
        1.4 本研究的目的意義
試驗(yàn)研究
    第二章 外泌體在PPRV傳播過(guò)程中的作用
        2.1 材料
            2.1.1 細(xì)胞和毒株
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 主要試劑
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            2.2.2 病毒增殖、毒力測(cè)定及病毒接種
            2.2.3 外泌體的提取、純化及純度鑒定
            2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PPRV接種細(xì)胞后外泌體分泌情況
            2.2.5 激光共聚焦分析外泌體是否包裹PPRV成分
            2.2.6 普通PCR檢測(cè)外泌體中PPRV核酸水平
            2.2.7 熒光定量PCR定量細(xì)胞內(nèi)外病毒RNA
            2.2.8 Western Blot分析外泌體中是否包裹病毒N蛋白
            2.2.9 GW4869處理細(xì)胞抑制外泌體分泌
            2.2.10 數(shù)據(jù)分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 PPRV感染誘導(dǎo)細(xì)胞外泌體分泌水平升高
            2.3.2 外泌體的純度鑒定
            2.3.3 PPRV感染源外泌體在PPRV傳播中的作用
            2.3.4 外泌體抑制劑處理對(duì)PPRV外泌體傳播途徑的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 外泌體介導(dǎo)PPRV傳播的作用機(jī)制
        3.1 材料
            3.1.1 主要儀器
            3.1.2 主要試劑
        3.2 方法
            3.2.1 雷帕霉素誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對(duì)外泌體分泌的影響
            3.2.2 干擾自噬關(guān)鍵基因抑制自噬對(duì)外泌體分泌的影響
            3.2.3 過(guò)表達(dá)或者干擾TSG101對(duì)外泌體分泌和病毒釋放的影響
            3.2.4 不同病毒蛋白與TSG101的相互作用
            3.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 雷帕霉素誘導(dǎo)細(xì)胞自噬增加外泌體分泌水平
            3.3.2 干擾細(xì)胞自噬抑制外泌體分泌水平
            3.3.3 TSG101 調(diào)控外泌體介導(dǎo)的PPRV的釋放
            3.3.4 PPRV-N、PPRV-H和 PPRV-C與 TSG101 的互作關(guān)系
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3883964