應(yīng)用Cfa斷裂內(nèi)含肽構(gòu)建了一種新型的親和純化系統(tǒng),并完成對目的蛋白無標簽純化。首先對Cfa斷裂內(nèi)含肽的IN片段與IC片段進行分子改造,通過研究在自由混合條件下的斷裂情況,測定了其斷裂速率。其次以改造后的IN片段作為配體與環(huán)氧活化的瓊脂糖微球載體偶聯(lián),制備了IN親和層析介質(zhì);IC片段作為親和標簽與目的蛋白GFP融合,并利用IN親和層析介質(zhì)實現(xiàn)對目的蛋白進行無標簽純化。結(jié)果表明,將IN與IC-GFP片段混合后,30s內(nèi)即可斷裂超過50%,4 h內(nèi)即可完全斷裂;IN親和層析介質(zhì)的靜態(tài)載量為66.78 mg×m L^-1,動態(tài)吸附載量約為30 mg×m L^-1;純化后的綠色熒光蛋白(GFP)純度達到了96.7%,回收率為29.3%。Cfa斷裂內(nèi)含肽的應(yīng)用為開發(fā)新型親和純化技術(shù)提供了一種潛在的方法。

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