發(fā)布時間：2024-01-01 07:34

　　異沙葉蟬是一種重要的農(nóng)業(yè)害蟲,其寄主廣泛,并可通過取食植物汁液傳播小麥矮縮病毒和一種新型彈狀病毒-小麥黃條紋病毒(wheat yellow striate alphanucleorhabdovirus,WYSV)。切斷異沙葉蟬對病毒的傳播是防治病毒病害最行之有效的方法之一,而闡明異沙葉蟬與病毒的互作機(jī)制是明確傳毒機(jī)制的關(guān)鍵。因此本研究以異沙葉蟬及其傳播的WYSV為研究對象,篩選異沙葉蟬體內(nèi)與傳播WYSV相關(guān)的介體蛋白并解析其功能,為阻斷以異沙葉蟬傳播植物彈狀病毒提供新的位點(diǎn)靶標(biāo)。本研究首先利用RNA-seq技術(shù)分析了攜帶WYSV的異沙葉蟬轉(zhuǎn)錄本,與健康對照組相比,共鑒定出2896個差異表達(dá)基因,其中745個為上調(diào)表達(dá)基因,2151個為下調(diào)表達(dá)基因。GO功能注釋表明這些基因參與了幾丁質(zhì)代謝、糖代謝以及囊泡運(yùn)輸?shù)榷喾N生物學(xué)過程。進(jìn)一步利用WYSV G蛋白抗體通過免疫共沉淀(CO-IP)實(shí)驗(yàn),結(jié)合質(zhì)譜分析的方法從異沙葉蟬體內(nèi)共篩選到20種候選蛋白,包括膜組分的跨膜蛋白5,參與胞吐的Exocyst復(fù)合成分1(SEC3),參與神經(jīng)傳輸?shù)囊阴Ｄ憠A受體(Acetylcholine receptor ...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號對照表
第一章 緒論
    1.1 介體昆蟲傳播植物病毒機(jī)制的研究
        1.1.1 非持久性和半持久性病毒的傳毒機(jī)制研究
        1.1.2 持久性病毒的傳毒機(jī)制研究
    1.2 彈狀病毒研究進(jìn)展
        1.2.1 植物彈狀病毒分類
        1.2.2 彈狀病毒基因組結(jié)構(gòu)及蛋白功能
        1.2.3 彈狀病毒傳毒機(jī)制
        1.2.4 小麥黃條紋病毒研究進(jìn)展
    1.3 昆蟲特異性病毒研究進(jìn)展
        1.3.1 昆蟲特異性病毒概況
        1.3.2 昆蟲特異性病毒的檢測技術(shù)
        1.3.3 昆蟲特異性病毒的應(yīng)用
    1.4 呼腸孤病毒研究進(jìn)展
        1.4.1 呼腸孤病毒簡介
        1.4.2 呼腸孤病毒基因組結(jié)構(gòu)及組裝運(yùn)輸
    1.5 病毒與介體互作的研究方法
        1.5.1 轉(zhuǎn)錄組分析
        1.5.2 分離泛素酵母雙雜交系統(tǒng)
        1.5.3 免疫共沉淀(CO-IP)
    1.6 本研究目的意義及技術(shù)路線
第二章 篩選鑒定異沙葉蟬體內(nèi)與WYSV-G蛋白互作的蛋白質(zhì)
    2.1 材料與方法
        2.1.1 傳毒介體昆蟲與植物材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所用試劑
        2.1.3 轉(zhuǎn)錄組測序分析樣品的制備
        2.1.4 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析及RT-qPCR驗(yàn)證
        2.1.5 免疫共沉淀及質(zhì)譜分析
        2.1.6 候選蛋白分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 轉(zhuǎn)錄組測序分析異沙葉蟬體內(nèi)與WYSV互作的蛋白質(zhì)
        2.2.2 免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)篩選與WYSV互作的蛋白質(zhì)
    2.3 總結(jié)與討論
第三章 WYSV-G與異沙葉蟬SEC3和ARSA1兩種候選蛋白的互作驗(yàn)證
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑及儀器
        3.1.2 目的基因克隆
        3.1.3 誘餌載體和獵物載體構(gòu)建
        3.1.4 誘餌載體功能驗(yàn)證
        3.1.5 酵母雙雜交及β-galactosidase驗(yàn)證SEC3,ARSA1與WYSV G互作
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 目的基因的克隆
        3.2.2 誘餌載體和獵物載體構(gòu)建
        3.2.3 誘餌載體功能驗(yàn)證結(jié)果
        3.2.4 酵母雙雜交及β-galactosidase驗(yàn)證SEC3,ARSA1與WYSV G互作
    3.3 總結(jié)與討論
第四章 異沙葉蟬內(nèi)生呼腸孤新病毒PARV鑒定及驗(yàn)證
    4.1 材料與方法
        4.1.1 昆蟲收集與飼養(yǎng)
        4.1.2 主要試劑及儀器
        4.1.3 透射電鏡樣品制備
        4.1.4 雙鏈RNA的提取方法
        4.1.5 轉(zhuǎn)錄組測序和序列組裝
        4.1.6 RACE擴(kuò)增獲得病毒全基因組
        4.1.7 生物信息學(xué)分析病毒基因組特征
        4.1.8 RT-PCR
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 透射電鏡發(fā)現(xiàn)異沙葉蟬共生新病毒
        4.2.2 異沙葉蟬呼腸孤病毒的全基因組結(jié)構(gòu)及序列特性
        4.2.3 病毒dsRNA的提取分析
        4.2.4 PARV系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析
        4.2.5 WYSV與 PARV在異沙葉蟬體內(nèi)的復(fù)合侵染
    4.3 總結(jié)與討論
第五章 全文總結(jié)與展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3876357