dsRNase是一種DNA/RNA非特異性堿性核酸酶,這類酶具有廣泛的底物特異性,可影響鱗翅目昆蟲的RNA干擾效率。為驗證從家蠶消化液分離的BmdsRNase能否在家蠶體外表達并降解dsRNA,根據(jù)其功能域構(gòu)建了3個不同基因片段的表達載體,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌進行原核表達,體外誘導培養(yǎng)后進行dsRNA的降解試驗。SDS-PAGE顯示BmdsRNase的3個基因片段均能在原核系統(tǒng)中表達,最適宜的蛋白質(zhì)誘導時間為2 h,表達產(chǎn)物主要以包涵體形式存在。實時定量PCR結(jié)果表明,3種重組表達菌的表達產(chǎn)物均可降解dsRNA。上述結(jié)果為后續(xù)研究BmdsRNase的功能,以及鱗翅目昆蟲的RNA干擾機制提供了實驗數(shù)據(jù)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 家蠶的飼養(yǎng)與解剖
    1.2 總RNA的提取和c DNA合成
    1.3 引物設(shè)計
    1.4 BmdsRNase的基因片段克隆
    1.5 表達載體的構(gòu)建
    1.6 BmdsRNase蛋白的原核誘導表達
    1.7 ds GFP的合成
    1.8 基于dsRNA降解反應的BmdsRNase酶活性測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 BmdsRNase不同基因片段的克隆和鑒定
    2.2 BmdsRNase原核表達載體的構(gòu)建
    2.3 BmdsRNase蛋白誘導表達條件的優(yōu)化
    2.4 BmdsRNase蛋白表達形式的鑒定
    2.5 BmdsRNase蛋白降解dsRNA能力的檢測
3 討論



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