赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)是國際癌癥研究機構(gòu)認(rèn)定的"2B"類致癌物。黑曲霉Aspergillus niger是美國食品藥品監(jiān)督局認(rèn)可的食品安全菌。然而近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)某些黑曲霉菌株能夠產(chǎn)生OTA,這會對人類健康構(gòu)成潛在威脅。闡明黑曲霉生物合成OTA的關(guān)鍵基因有助于理解OTA生物合成機制,這對OTA污染的防控具有重要意義。本研究克隆了產(chǎn)OTA黑曲霉中非核糖體肽合成酶(NRPS)編碼基因(An15g07910),并對其進行了生物信息學(xué)分析,在此基礎(chǔ)上采用同源重組的方法敲除了該基因,獲得了一株性能穩(wěn)定的敲除突變株Δnrps。與野生株相比,Δnrps突變株的表型在CYA培養(yǎng)基中并無明顯改變,但在7d培養(yǎng)期間完全失去了合成赭曲霉毒素α(ochratoxinα,OTα)和OTA的能力,而赭曲霉毒素β(ochratoxinβ,OTβ)的合成不受影響。在野生株培養(yǎng)過程中,該nrps基因前4d表達(dá)量逐漸增大,并在第4天達(dá)到最高,隨后基因表達(dá)量逐漸下降并趨于穩(wěn)定,這與OTA的含量變化基本一致。結(jié)果表明該nrps基因(An15g07910)參與OTA的生物合成,其編碼的NRPS可能負(fù)責(zé)催...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒：
        1.1.2 引物：
        1.1.3 試劑：
        1.1.4 培養(yǎng)基：
    1.2 nrps基因的克隆與序列分析
    1.3 Δnrps敲除菌株的構(gòu)建
    1.4 野生株與Δnrps突變株菌落直徑、菌落形態(tài)與分生孢子差異
    1.5 野生株與Δnrps突變株中OTA及其衍生物的檢測
    1.6 OTA動力學(xué)分析、OTA基因簇內(nèi)基因表達(dá)量的變化
2 結(jié)果與分析
    2.1 nrps基因的克隆與序列分析
    2.2 敲除菌株Δnrps的構(gòu)建
    2.3 野生株與Δnrps突變株的菌落形態(tài)、菌落直徑與分子孢子形態(tài)差異
    2.4 OTA及其衍生物的產(chǎn)量檢測
    2.5 基因的相對表達(dá)量與OTA動力學(xué)分析
3 討論



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