PAN-1是一個結(jié)構(gòu)相對簡單的蛋白,除了主要的LRR結(jié)構(gòu)域(leucine-rich repeat domain)之外,主要還有一個跨膜結(jié)構(gòu)域。LRR結(jié)構(gòu)域決定了PAN-1的功能,而跨膜結(jié)構(gòu)域決定了PAN-1的定位。為了探究PAN-1的亞細胞定位,我通過DLG-1::RFP來標記seam cell與表皮的連接處,間接的標記seam cell細胞膜。通過共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn),PAN-1與DLG-1并不完全共定位,而是存在于seam cell的細胞膜上,并且在seam cell膜上的分布受細胞極性的影響。MYRF-1作為重要的轉(zhuǎn)錄因子,參與秀麗隱桿線蟲的發(fā)育調(diào)控,與PAN-1一樣定位于細胞膜上。先前實驗我們發(fā)現(xiàn)PAN-1能夠協(xié)助MYRF-1行使自身功能。為了進一步了解PAN-1是如何協(xié)助MYRF-1行使功能的,我通過構(gòu)建不同的截短突變體,共轉(zhuǎn)染至HEK293-T細胞,后續(xù)免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)PAN-1的LRR結(jié)構(gòu)域與MYRF-1的C2結(jié)構(gòu)域之間存在著互作。同時當MYRF-1缺失跨膜結(jié)構(gòu)域后即使存在C2結(jié)構(gòu)域也無法與PAN-1互作,這說明兩者的互作是在兩個蛋白正確的定位于細胞膜上的基礎(chǔ)上而存在的。pa...

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstracts
1 引言
    1.1 MYRF是發(fā)育所必需的
    1.2 MYRF-1的剪切
    1.3 PAN-1
    1.4 突觸重塑
    1.5 seam cell
    1.6 表皮與蛻皮
2 實驗內(nèi)容與設(shè)計
    2.1 PAN-1的細胞膜定位
    2.2 驗證在HEK293-T細胞系中PAN-1 能否與MYRF-1 互作
    2.3 PAN-1與MYRF-1 的互作模式的探究
    2.4 PAN-1對于秀麗隱桿線蟲發(fā)育的影響
        2.4.1 pan-1對于秀麗隱桿線蟲D型神經(jīng)元突觸重塑的影響
        2.4.2 pan-1對于秀麗隱桿線蟲表皮的影響
        2.4.3 pan-1 對于seam cell分裂的影響
        2.4.4 pan-1對于腸道的影響
3 實驗材料與方法
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗試劑與配方
        3.2.1 NGM培養(yǎng)基配方及配置
        3.2.2 線蟲凍存液配方及配制
        3.2.3 線蟲培養(yǎng)的鹽溶液
        3.2.4 LB液體培養(yǎng)基、LB板配制
        3.2.5 PCR相關(guān)溶液配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 同步化
        3.3.2 顯微注射
        3.3.3 免疫共沉淀(Co-IP)
        3.3.4 CRISPR-Cas9 編輯pan-1^LoxP等位基因
4 實驗結(jié)果
    4.1 PAN-1的定位
    4.2 PAN-1 能與MYRF-1 互作
    4.3 PAN-1與MYRF-1 互作結(jié)構(gòu)域的分析
    4.4 PAN-1對于線蟲發(fā)育的影響
        4.4.1 PAN-1調(diào)控D型運動神經(jīng)元的突觸重塑
        4.4.2 表皮缺失PAN-1導(dǎo)致蛻皮異常
        4.4.3 seam cell中特異性敲低PAN-1 對于線蟲的影響
        4.4.4 腸道特異性敲低PAN-1對于線蟲的影響
5 實驗總結(jié)及討論
    5.1 實驗總結(jié)
    5.2 討論
參考文獻
作者簡歷及在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3865236