線粒體是細(xì)胞產(chǎn)生能量的“動(dòng)力工廠”,對(duì)細(xì)胞內(nèi)眾多生理功能的正常運(yùn)轉(zhuǎn)具有重要意義。雨生紅球藻是天然抗氧化劑蝦青素的理想來源,是具有重要的營養(yǎng)及研究價(jià)值的藻類食品。本文通過體外酵母細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?證實(shí)雨生紅球藻可延長酵母細(xì)胞的時(shí)序壽命。創(chuàng)新性構(gòu)建了SLC25A46(一種編碼線粒體外膜蛋白的基因)基因敲除的線粒體損傷小鼠模型,對(duì)該小鼠模型的可靠性及合理性進(jìn)行了系統(tǒng)性評(píng)價(jià),并基于該SLC25A46基因敲除致線粒體損傷小鼠模型,研究了雨生紅球藻對(duì)線粒體功能保護(hù)的作用機(jī)制。在體外酵母細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),雨生紅球藻在供試濃度(200及500μg/m L)下對(duì)酵母細(xì)胞生長無明顯影響。進(jìn)一步的研究表明,雨生紅球藻在干預(yù)的第5及第7天可顯著提高酵母細(xì)胞存活率,延長酵母細(xì)胞的時(shí)序壽命。為探究雨生紅球藻影響酵母時(shí)序壽命的潛在機(jī)理,對(duì)雨生紅球藻干預(yù)下酵母細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)、膜電位(Mitochondrial Membrane Potential,MMP)及碳水化合物積累量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明,高及低濃度的雨生紅球藻可分別顯著性降低酵母細(xì)胞內(nèi)ROS水平的31.21%(p...

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 雨生紅球藻的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 雨生紅球藻的概述
        1.1.2 雨生紅球藻活性成分及其功效
    1.2 線粒體的概述
        1.2.1 線粒體簡(jiǎn)介
        1.2.2 線粒體的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 線粒體的功能
    1.3 線粒體相關(guān)疾病及模型
        1.3.1 線粒體相關(guān)疾病概述
        1.3.2 線粒體損傷模型及其研究進(jìn)展
        1.3.3 目前線粒體損傷模型存在的問題
    1.4 SLC25A46基因敲除致線粒體損傷小鼠模型的構(gòu)建
        1.4.1 SLC25A46基因的簡(jiǎn)介
        1.4.2 SLC25A46基因敲除致線粒體損傷小鼠模型的構(gòu)建流程
            1.4.2.1 SLC25A46基因基本信息
            1.4.2.2 基于CRISPR/Cas9 技術(shù)敲除SLC25A46 基因小鼠模型構(gòu)建流程
    1.5 本論文的選題依據(jù)及研究內(nèi)容
        1.5.1 本論文的選題依據(jù)
        1.5.2 本論文的研究內(nèi)容
第二章 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞時(shí)序壽命的影響及其潛在的機(jī)理探究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 培養(yǎng)基的配制與滅菌
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞生長的影響
        2.3.2 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞時(shí)序壽命的影響
        2.3.3 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞活性氧水平的影響
        2.3.4 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞膜電位的影響
        2.3.5 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞碳水化合物積累量的影響
        2.3.6 數(shù)據(jù)處理
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞生長的影響
        2.4.2 雨生紅球藻對(duì)酵母時(shí)序壽命的影響
        2.4.3 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞活性氧水平的影響
        2.4.4 雨生紅球藻對(duì)酵母細(xì)胞膜電位的影響
        2.4.5 雨生紅球藻增加酵母細(xì)胞碳水化合物積累量
            2.4.5.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定
            2.4.5.2 雨生紅球藻增加酵母細(xì)胞碳水化合物積累量
    2.5 本章小結(jié)
第三章 SLC25A46基因敲除致線粒體損傷模型小鼠的繁育與模型分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 SLC25A46基因敲除小鼠的飼養(yǎng)條件、擴(kuò)群繁殖及基因型鑒定
            3.3.1.1 小鼠飼養(yǎng)條件
            3.3.1.2 小鼠的擴(kuò)群繁殖
            3.3.1.3 小鼠基因型鑒定
        3.3.2 小鼠表型分析
            3.3.2.1 小鼠體型體重分析
            3.3.2.2 小鼠壽命分析
            3.3.2.3 小鼠器官發(fā)育情況分析
        3.3.3 小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)
            3.3.3.1 小鼠抓力實(shí)驗(yàn)
            3.3.3.2 小鼠懸掛實(shí)驗(yàn)
            3.3.3.3 小鼠足跡實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 小鼠MDA含量、CAT及 SOD酶酶活力的檢測(cè)
        3.3.5 小鼠組織切片、HE染色及觀察
        3.3.6 透射電鏡觀察線粒體結(jié)構(gòu)
        3.3.7 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 小鼠繁育分析
        3.4.2 小鼠表型分析
            2.4.2.1 小鼠體型體重分析
            2.4.2.2 小鼠壽命分析
            2.4.2.3 小鼠器官發(fā)育情況分析
        3.4.3 小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)
            3.4.3.1 小鼠抓力實(shí)驗(yàn)
            3.4.3.2 小鼠懸掛實(shí)驗(yàn)
            3.4.3.3 小鼠足跡實(shí)驗(yàn)
        3.4.4 小鼠MDA含量、CAT及 SOD酶酶活力的檢測(cè)
        3.4.5 小鼠組織形態(tài)分析
        3.4.6 線粒體結(jié)構(gòu)表征
    3.5 本章小結(jié)
第四章 雨生紅球藻對(duì)線粒體損傷小鼠保護(hù)效果評(píng)價(jià)
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
        4.3.2 小鼠抓力實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 小鼠相關(guān)生理指標(biāo)的測(cè)定
        4.3.4 小鼠組織切片、HE染色及觀察
        4.3.5 數(shù)據(jù)處理
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 雨生紅球藻對(duì)模型小鼠行為學(xué)的改善評(píng)價(jià)
        4.4.2 雨生紅球藻對(duì)模型小鼠抗氧化能力的影響
        4.4.3 雨生紅球藻對(duì)模型小鼠肝臟組織形態(tài)的改善評(píng)價(jià)
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論與展望
    一.結(jié)論
    二.本論文的創(chuàng)新點(diǎn)
    三.展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
附件



本文編號(hào)：3856459