光照周期是影響植物的生長發(fā)育的重要環(huán)境因子,以往研究已識別并特化了部分光照周期響應(yīng)成花基因;光合作用同樣受到光照影響,盡管有眾多研究識別了 PSⅠ和PSⅡ組成蛋白,如CP24和CSS等,但這些蛋白表達的上游調(diào)控基因有哪些、它們?nèi)绾雾憫?yīng)光照周期調(diào)控光合作用卻有待確定。本實驗室前期研究識別了馬鈴薯光照響應(yīng)基因St904(DMG400033904),依據(jù)其氨基酸序列組成,基因組注釋預(yù)測St904屬于單MYB轉(zhuǎn)錄因子家族;文獻和基因組數(shù)據(jù)庫檢索,未見St904及其同源物功能的研究報道。依據(jù)St904 cDNA序列,本研究運用重組基因設(shè)計和合成、體內(nèi)轉(zhuǎn)化、過量和抑制表達及其表型測定、相關(guān)基因表達測定和凝膠電泳遷移(EMSA,electrophoretic mobility shift assay)等方法,確定了St904參與形成的表型及其形成原因。主要結(jié)果如下:1.合成35S-St904和His-St904基因cDNA,亞克隆35S-St904獲得重組載體后,轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101,篩選獲得旨在體內(nèi)過量和抑制St904表達的陽性重組根癌農(nóng)桿菌菌株GV3101-pC-35S-St904+/-和 G...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表（Abbreviation Table)
第一章 文獻綜述
    1.1 光照周期響應(yīng)基因及其成花功能
    1.2 葉綠素代謝及其對光照的響應(yīng)
        1.2.1 葉綠素代謝
        1.2.2 光照周期調(diào)控葉綠素積累
        1.2.3 光照調(diào)控葉綠素結(jié)合蛋白積累
    1.3 光照周期響應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子St904
    1.4 單MYB轉(zhuǎn)錄因子及其功能
        1.4.1 MYB基因家族及其功能
        1.4.2 單MYB轉(zhuǎn)錄因子的研究進展
    1.5 研究目的及內(nèi)容
        1.5.1 研究目的
        1.5.2 課題研究內(nèi)容
第二章 St904基因表達載體的構(gòu)建
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 菌種和質(zhì)粒
        2.2.2 引物序列
        2.2.3 實驗試劑
        2.2.4 主要設(shè)備及儀器
        2.2.5 實驗相關(guān)培養(yǎng)基
    2.3 實驗方法
        2.3.1 St904 cDNA的生物學(xué)信息分析
        2.3.2 St904 cDNA的獲得
        2.3.3 St904基因亞克隆
        2.3.4 His-St904基因表達載體的構(gòu)建
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 St904是馬鈴薯MYB家族中保守的成員
        2.4.2 St904基因核酸序列合成及測序
        2.4.3 過量和抑制表達載體的構(gòu)建
        2.4.4 His-St904基因表達載體的構(gòu)建
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 St904體內(nèi)轉(zhuǎn)化及表達
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 植物材料
        3.2.2 菌種和質(zhì)粒
        3.2.3 實驗試劑
        3.2.4 主要設(shè)備及儀器
        3.2.5 實驗相關(guān)培養(yǎng)基
        3.2.6 實驗常用溶液
    3.3 實驗方法
        3.3.1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌
        3.3.2 馬鈴薯St904基因的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.3.3 轉(zhuǎn)化株系的陽性鑒定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 根癌農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化及鑒定
        3.4.2 目的基因的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
第四章 St904抑制和過量表達決定的生理表型
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 植物材料
        4.2.2 主要設(shè)備及儀器
        4.2.3 實驗常用溶液
    4.3 實驗方法
        4.3.1 過量和抑制St904表達的RT-qPCR
        4.3.2 表型觀察
        4.3.3 過量和抑制St904表達陽性株系葉片葉綠素含量測定
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 過量和抑制St904表達的RT-qPCR
        4.4.2 St904基因陽性轉(zhuǎn)化株系形態(tài)表型觀察
        4.4.3 過量和抑制St904表達陽性株系葉片葉綠素含量的測定
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 St904參與調(diào)控的基因識別
    5.1 引言
    5.2 實驗材料
        5.2.1 實驗菌株及質(zhì)粒
        5.2.2 引物設(shè)計及合成
        5.2.3 工具酶和生化試劑
        5.2.4 實驗儀器及設(shè)備
        5.2.5 實驗所用培養(yǎng)基
        5.2.6 實驗相關(guān)溶液
    5.3 實驗方法
        5.3.1 葉綠素代謝相關(guān)基因的篩選
        5.3.2 重組載體pCzn1-904和pET-22b(+)-904的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
        5.3.3 目的基因的原核表達純化與Westemblot分析
        5.3.4 DNA探針制備
        5.3.5 目的蛋白與DNA探針結(jié)合反應(yīng)
        5.3.6 EMSA檢測反應(yīng)
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 葉綠素代謝相關(guān)基因的篩選
        5.4.2 原核表達載體pCzn1-904和pET-22b(+)-904的構(gòu)建及鑒定
        5.4.3 原核產(chǎn)物的表達
        5.4.4 融合蛋白的純化和Westernblot分析
        5.4.5 EMSA試驗驗證CP24和CSS啟動子與St904基因相結(jié)合
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄
個人簡歷



本文編號：3850704