為了解決亞油酸異構(gòu)酶(Linoleic Acid Isomerase,PAI)在大腸桿菌中形成包涵體的問題,選擇麥芽糖結(jié)合蛋白(Maltose-Binding Protein,MBP)標(biāo)簽和低溫誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)pColdV,構(gòu)建了大腸桿菌重組表達(dá)菌株E.coli BL21(pCold-Mpai),并對其誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行了優(yōu)化。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,融合蛋白MBP-PAI成功表達(dá),重組菌的最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為:誘導(dǎo)溫度15℃、IPTG添加量0.1 mmol/L、誘導(dǎo)時間12 h,在該誘導(dǎo)條件下,與未融合MBP的PAI相比,MBPPAI的可溶性表達(dá)量為后者的18倍、酶活為后者的1.5倍。經(jīng)過MBPTrap HP親和層析柱純化后,MBP-PAI純蛋白質(zhì)的比酶活為1.58 U/mg,能夠轉(zhuǎn)化亞油酸形成反10,順12-共軛亞油酸。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 培養(yǎng)基
    1.4 重組融合蛋白質(zhì)表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.5 重組融合蛋白質(zhì)誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化
        1.5.1 誘導(dǎo)溫度對MBP-PAI蛋白表達(dá)的影響
        1.5.2 誘導(dǎo)劑IPTG濃度對MBP-PAI蛋白表達(dá)的影響
        1.5.3 誘導(dǎo)時間對MBP-PAI蛋白表達(dá)的影響
    1.6 最佳誘導(dǎo)條件下MBP-PAI蛋白的可溶性表達(dá)量比較
    1.7 MBP-PAI重組蛋白的純化
    1.8 酶活測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 融合表達(dá)載體pCold-MPAI的構(gòu)建及鑒定
    2.2 誘導(dǎo)溫度對重組蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
    2.3 誘導(dǎo)劑IPTG濃度對MBP-PAI蛋白表達(dá)的影響
    2.4 誘導(dǎo)時間對MBP-PAI蛋白表達(dá)的影響
    2.5 最佳誘導(dǎo)條件下重組蛋白質(zhì)的可溶性表達(dá)情況
    2.6 MBP-PAI重組蛋白的純化
    2.7 MBP-PAI重組蛋白的酶活測定
3 結(jié)語



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