放線菌是一類至關(guān)重要的微生物資源。放線菌菌絲在生長中后期產(chǎn)生次級代謝產(chǎn)物,來對抗周圍環(huán)境的不良條件,以保證自身更好的生長,并且廣泛應(yīng)用于人類生產(chǎn)生活中。對具有抗菌活性的放線菌進(jìn)行篩選十分重要。目前使用的篩選方法大多數(shù)都是基于大體積液體或固體培養(yǎng)進(jìn)行篩選,篩選效果具有一定的局限性。微流控液滴技術(shù)的發(fā)展為抗菌活性放線菌的篩選提供了新的實(shí)驗(yàn)方法和思路。本研究以東方擬無枝酸菌(Pseudomonas orientalis)JCM 423 5、吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)FXJ1.264 和熒光菌株金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)RN4220為研究對象,主要獲得以下結(jié)果:(1)使用不同體積的液滴對微生物進(jìn)行培養(yǎng)和生長觀察。綜合考慮后發(fā)現(xiàn),在5nL、1μL大小的液滴中放線菌菌絲可以正常生長。在1μL大小的液滴中S.aureus RN4220能夠保持熒光質(zhì)粒完整傳代,保證其良好的熒光指示作用。(2)本研究構(gòu)建了微流控液滴對互作放線菌進(jìn)行篩選的篩選方法,使用1μL大小的液滴對放線菌進(jìn)行7-14天的培養(yǎng),觀察到放線菌菌絲正常生長后,加入1...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 放線菌簡述
        1.2.1 放線菌分類學(xué)研究
        1.2.2 放線菌次級代謝產(chǎn)物的研究
        1.2.3 放線菌及其次級代謝產(chǎn)物研究進(jìn)展
            1.2.3.1 土壤放線菌研究進(jìn)展
            1.2.3.2 海洋放線菌研究進(jìn)展
        1.2.4 放線菌及其次級代謝產(chǎn)物與其他動植物、微生物之間關(guān)系
    1.3 液滴微流控技術(shù)簡述
        1.3.1 液滴微流控技術(shù)
            1.3.1.1 微流控芯片簡述
            1.3.1.2 微液滴生成的種類與方法
            1.3.1.3 微液滴技術(shù)應(yīng)用范圍
        1.3.2 基于微流控液滴的微生物研究
            1.3.2.1 基于微液滴的微生物實(shí)驗(yàn)
        1.3.3 微流控技術(shù)應(yīng)用的前景與挑戰(zhàn)
    1.4 立題設(shè)想和主要研究內(nèi)容
        1.4.1 研究內(nèi)容
        1.4.2 技術(shù)路線
2 菌株的活化和傳統(tǒng)培養(yǎng)
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及材料
        2.2.3 培養(yǎng)基的配置
        2.2.4 菌株的活化與培養(yǎng)
        2.2.5 放線菌傳統(tǒng)培養(yǎng)
        2.2.6 金黃色葡萄球菌的傳統(tǒng)培養(yǎng)
        2.2.7 金黃色葡萄球菌熒光質(zhì)粒保持檢測
        2.2.8 傳統(tǒng)培養(yǎng)抑菌圈實(shí)驗(yàn)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 放線菌菌株的活化和傳統(tǒng)培養(yǎng)
        2.3.2 金黃色葡萄球菌的傳統(tǒng)培養(yǎng)以及質(zhì)�；钚詸z測
        2.3.3 傳統(tǒng)培養(yǎng)抑菌圈實(shí)驗(yàn)
    2.4 小結(jié)
3 微液滴放線菌和金黃色葡萄球菌互作篩選方法的建立
    3.1 引言
    3.2 放線菌的液滴培養(yǎng)
        3.2.0 材料與方法
        3.2.1 放線菌菌液過濾實(shí)驗(yàn)
        3.2.2 皮升(pL)大小液滴放線菌培養(yǎng)
            3.2.2.1 硅片制作
            3.2.2.2 PDMS芯片制作
            3.2.2.3 PDMS芯片封接
            3.2.2.4 液滴生成
            3.2.2.5 液滴融合
            3.2.2.6 液滴分選
        3.2.3 納升(nL)大小液滴放線菌培養(yǎng)
            3.2.3.1 微流控芯片制作
            3.2.3.2 平皿硅烷化處理
            3.2.3.3 納升(nL)大小液滴生成
            3.2.3.4 納升(nL)大小液滴觀察
        3.2.4 微升(μL)級別液滴生成
            3.2.4.1 微升(μL)級別液滴生成和融合
            3.2.4.2 微升(μL)級別液滴分析
        3.2.5 金黃色葡萄球菌 aureus RN4220生長曲線測定
        3.2.6 互作放線菌液滴篩選方法建立
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 4皮升(pL)級別液滴放線菌培養(yǎng)結(jié)果
            3.3.1.1 PDMS芯片制作
            3.3.1.2 4皮升(pL)液滴生成
            3.3.1.3 液滴破乳觀察
        3.3.2 6納升(nL)級別液滴放線菌培養(yǎng)結(jié)果
            3.3.2.1 塑料平皿硅烷化處理?xiàng)l件優(yōu)化
            3.3.2.2 6納升(nL)液滴的生成
            3.3.2.3 液滴包裹放線菌生長觀察
            3.3.2.4 菌絲片段PCR擴(kuò)增檢測
            3.3.2.5 6納升(nL)液滴培養(yǎng)結(jié)果
        3.3.3 微升(μL)級別液滴放線菌培養(yǎng)結(jié)果
            3.3.3.1 已知放線菌生長培養(yǎng)觀察
            3.3.3.2 金黃色葡萄球菌S.aureus RN4220液滴培養(yǎng)結(jié)果
            3.3.3.3 菌株互作結(jié)果觀察
            3.3.3.4 酶標(biāo)儀檢測結(jié)果
            3.3.3.5 16S rRNA基因測序結(jié)果
    3.4 小結(jié)
4 土壤樣品互作放線菌篩選
    4.1 引言
    4.2 傳統(tǒng)培養(yǎng)
        4.2.1 材料與方法
        4.2.2 土壤原始培養(yǎng)基的制備
        4.2.3 樣品傳統(tǒng)培養(yǎng)對照
    4.3 液滴培養(yǎng)
        4.3.1 抗生素添加對熒光指示菌株的影響
        4.3.2 土壤樣品微液滴培養(yǎng)
        4.3.3 使用熒光菌株進(jìn)行活性測試
        4.3.4 Barcode引物設(shè)計(jì)
        4.3.5 已知菌液滴培養(yǎng)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)
            4.4.1.1 平皿觀察結(jié)果
            4.4.1.2 傳統(tǒng)培養(yǎng)16S rRNA基因測序結(jié)果
        4.4.2 液滴培養(yǎng)結(jié)果
            4.4.2.1 Barcode引物設(shè)計(jì)
            4.4.2.2 Barcode引物孔板PCR
            4.4.2.3 已知菌液滴培養(yǎng)
        4.4.3 高通量結(jié)果分析
    4.5 小結(jié)
5 討論與展望
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
導(dǎo)師簡介
獲得成果目錄
致謝



本文編號：3817302