目的:探討A型激酶錨定蛋白2(A-kinase anchoring protein 2,AKAP2)基因表達對生長板軟骨細胞(growth plate chondrocytes,GPCs)增殖、分化及細胞外基質(zhì)代謝的影響及作用機制。方法:設計AKAP2過表達和基因敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染GPCs對AKAP2進行過表達或干擾,構(gòu)建AKAP2過表達陰性對照組(Vector組)、AKAP2過表達組(AKAP2 OE組)、AKAP2干擾陰性對照組(si-NC組)、AKAP2干擾組(si-AKAP2組)和AKAP2 OE+U0126組[U0126:細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2 (extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)通路阻滯劑],記錄各組GPCs細胞增殖活力及鈣鹽沉積情況,檢測細胞外基質(zhì)中Ⅱ型膠原α1(collagen typeⅡalpha 1,COL2A1)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅱ型膠原(collagen typeⅡ,COLⅡ)、增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear an...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞來源
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
    1.4 實時熒光定量聚合酶鏈式反應（real-time quantitative-polymerase chain reaction,qPCR）檢測細胞中目標基因表達量
    1.5 MTT檢測細胞增殖
    1.6 蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot,WB）檢測細胞中目標蛋白表達量
    1.7 免疫熒光檢測細胞中COLⅡ蛋白表達
    1.8 茜素紅染色觀察細胞鈣鹽沉積能力
    1.9 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 AKAP2過表達對軟骨細胞增殖分化的影響
    2.2 AKAP2過表達對軟骨細胞ERK1/2磷酸化水平的影響
    2.3 U0126對軟骨細胞增殖分化的影響
3 討論



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