G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptors,GPCRs)是目前已知人類基因組內(nèi)最大的受體家族,廣泛分布于各個(gè)組織器官中,并參與調(diào)控機(jī)體幾乎所有的生命活動(dòng)。GPCRs主要通過(guò)G蛋白和arrestins介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。其中β-arrestins在受體的脫敏-內(nèi)化-復(fù)敏-再循環(huán)過(guò)程及G蛋白非依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要的調(diào)控作用。論文第一部分利用核磁探針TMSiPhe研究β-arrestin1的構(gòu)象變化。在實(shí)驗(yàn)室早期研究中,楊帆等人利用基因密碼子擴(kuò)展技術(shù)將二氟代酪氨酸插入β-arrestin1上7個(gè)磷酸基團(tuán)結(jié)合區(qū)域(命名為Site 1～7),通過(guò)19F NMR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)GPCR C-tail上不同的磷酸化編碼形式會(huì)引起β-arrestin1磷酸根結(jié)合口袋的差異化響應(yīng),調(diào)控β-arrestin1發(fā)生特異性構(gòu)象變化,進(jìn)而影響β-arrestin1與下游蛋白的相互作用。然而,β-arrestin1上具體某一個(gè)磷酸根結(jié)合位點(diǎn)是如何影響β-arrestin1的激活態(tài)構(gòu)型,調(diào)控β-arrestin 1下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)?基于Arun K.Shukla等人2013年發(fā)表在Nature上...

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一章 背景介紹
    1.1 G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)
        1.1.1 G蛋白偶聯(lián)受體簡(jiǎn)介
        1.1.2 G蛋白偶聯(lián)受體的結(jié)構(gòu)及分類
        1.1.3 經(jīng)典G蛋白依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        1.1.4 G蛋白偶聯(lián)受體的脫敏與內(nèi)吞
    1.2 arrestin
        1.2.1 arrestin簡(jiǎn)介
        1.2.2 arrestin的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 arrestin的功能
        1.2.4 GPCRs磷酸化C Tail與β-arrestin1的不同結(jié)合模式
    1.3 X射線晶體衍射
    1.4 核磁共振(MMR)
    1.5 生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)
    1.6 電化學(xué)生物傳感器
    1.7 本課題研究?jī)?nèi)容及意義
第二章 V2R T347磷酸化調(diào)控β-arrestin1的構(gòu)象變化及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
    2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.2 化學(xué)試劑
        2.2.3 生化試劑
        2.2.4 耗材和試劑盒
        2.2.5 生物材料
        2.2.6 實(shí)驗(yàn)試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 引物合成與DNA測(cè)序
        2.3.2 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.3.3 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.3.4 蛋白表達(dá)與純化
        2.3.5 蛋白鑒定
        2.3.6 X射線晶體衍射
        2.3.7 NMR實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 BRET實(shí)驗(yàn)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 β-arrestinl-V2Rpp-1-Fab30復(fù)合物X射線晶體衍射
        2.4.2 NMR實(shí)驗(yàn)
        2.4.3 B RET實(shí)驗(yàn)
    2.5 結(jié)果討論
第三章 A2AR腺苷受體電化學(xué)傳感器
    3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.2 化學(xué)試劑
        3.2.3 生化試劑
        3.2.4 耗材和試劑盒
        3.2.5 生物材料
        3.2.6 實(shí)驗(yàn)試劑配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 引物合成與DNA測(cè)序
        3.3.2 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.3.3 A2A蛋白的表達(dá)與純化
        3.3.4 β-arrestin1蛋白表達(dá)
        3.3.5 蛋白鑒定
        3.3.6 探針偶聯(lián)預(yù)實(shí)驗(yàn)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        3.4.2 A2A蛋白表達(dá)與純化
        3.4.3 探針標(biāo)記預(yù)實(shí)驗(yàn)
    3.5 結(jié)果討論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3793462