目的對(duì)CRISPR相關(guān)蛋白Cas3、Cas6及Cas9進(jìn)行表達(dá)純化,并測定其活性。方法在體外構(gòu)建帶有目的基因的質(zhì)粒,導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),通過大腸桿菌的過表達(dá),裂解并提取蛋白,利用His標(biāo)簽,可將目的蛋白純化出來;通過3種Cas蛋白對(duì)不同核酸的切割,分別設(shè)計(jì)3種核酸底物,再通過聚丙烯酰胺凝膠電泳,最終確定Cas蛋白的活性。結(jié)果成功表達(dá)并純化得到Cas3、Cas6及Cas93種蛋白,并根據(jù)其蛋白特性,與相應(yīng)的核酸底物進(jìn)行孵育,在電泳后通過凝膠成像,可觀察到3種蛋白均具有活性。結(jié)論表達(dá)純化的Cas3、Cas6及Cas9具有生物學(xué)功能,為其功能機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 蛋白表達(dá)
            1.2.1.1 Cas3
            1.2.1. 2 Cas6和Cas9
            1.2.1. 3 純化與透析
        1.2.2 酶活驗(yàn)證
            1.2.2. 1 Cas3
            1.2.2.2 Cas6
            1.2.2. 3 Cas9
2 結(jié)果
    2.1 蛋白的表達(dá)與純化
    2.2 濃度測定
    2.3 Cas3酶活驗(yàn)證
    2.4 Cas6酶活驗(yàn)證
    2.5 Cas9酶活驗(yàn)證
3 討論



本文編號(hào)：3780847