[目的]在大腸桿菌表達系統(tǒng)表達UvrB蛋白,優(yōu)化其表達和純化的條件,并初步研究其對抗紫外線傷害的功能。[方法]克隆大腸桿菌MG1655菌株UvrB編碼序列,采用酶切連接的方法構(gòu)建表達載體p Waldo-GFP-UvrB,并轉(zhuǎn)入BL21(DE3)表達菌株誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達,采用Ni-NTA親和層析以及分子篩層析的方法純化蛋白質(zhì),采用紫外光刺激的方法研究其細胞內(nèi)功能。[結(jié)果]成功構(gòu)建UvrB表達載體,獲得UvrB在BL21(DE3)中重組菌株,其表達條件為22℃,0. 2 mmol/L IPTG誘導(dǎo)20 h,UvrB以可溶蛋白的形式存在。SDS-PAGE結(jié)果顯示UvrB蛋白質(zhì)分子量約76 k Da與預(yù)期相符;經(jīng)純化后UvrB蛋白質(zhì)得率約為0. 6 mg/L培養(yǎng)基,純度> 85%,為其進一步研究奠定了基礎(chǔ)。[結(jié)論]研究克隆并構(gòu)建了大腸桿菌UvrB蛋白的原核表達體系,優(yōu)化了其純化方案,得到純度> 85%的可溶UvrB蛋白質(zhì),為進一步研究UvrB蛋白質(zhì)功能奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 Uvr B基因原核表達載體的構(gòu)建
        1.2.2 UvrB蛋白質(zhì)的表達
        1.2.3 UvrB蛋白質(zhì)的純化
        1.2.4 UvrB在紫外線損傷中的作用檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 Uvr B基因原核表達載體的構(gòu)建
    2.2 UvrB蛋白質(zhì)的表達
    2.3 UvrB蛋白質(zhì)的純化
    2.4 UvrB在紫外線損傷中的作用檢測
3 討論



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