在菜油品質(zhì)上黃籽相較于褐籽更為優(yōu)良,且更易于合成高質(zhì)量的生物柴油。已有研究表明TT1(TRANSPARENT TESTA1)基因是類(lèi)黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵基因,為了通過(guò)CRISPR/Cas9基因編輯載體驗(yàn)證TT1基因在白菜型油菜中的功能,本研究先在擬南芥中進(jìn)行了TT1基因的編輯。構(gòu)建了CRISPR/Cas9 TT1基因編輯載體,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)侵染擬南芥花序的遺傳轉(zhuǎn)化方式將編輯載體引入擬南芥Columbia生態(tài)型,通過(guò)表型觀察發(fā)現(xiàn)T1代12株陽(yáng)性苗中產(chǎn)生了11株表型株,其中1株表現(xiàn)為褐籽,2株表現(xiàn)為黃籽,9株表現(xiàn)為黃籽和褐籽的嵌合。測(cè)序檢測(cè)分析其突變型結(jié)果發(fā)現(xiàn),TT1靶位點(diǎn)處有單堿基缺失、單堿基插入、多個(gè)堿基缺失、堿基缺失后插入以及兩個(gè)靶位點(diǎn)之間多個(gè)堿基缺失的多種突變類(lèi)型。T2代獲得一株純合突變體,TT1兩個(gè)靶位點(diǎn)之間產(chǎn)生79 bp的堿基缺失,且全株表現(xiàn)為黃籽。本研究為CRISPR/Cas9載體在白菜型油菜中TT1基因功能驗(yàn)證提供借鑒,并為其它作物TT1同源基因的功能驗(yàn)證提供了新的突變體材料。

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 靶向TT1基因的CRISPR/Cas9載體的構(gòu)建
    1.2 陽(yáng)性苗的檢測(cè)
    1.3 突變體表型鑒定
    1.4 T1代陽(yáng)性株的突變檢測(cè)分析
    1.5 純合突變體的獲得
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料
    3.2 CRISPR/Cas9目標(biāo)位點(diǎn)的選擇及載體構(gòu)建
    3.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.4 擬南芥tt1突變體的檢測(cè)及表型觀察
    3.5 擬南芥純合突變體的獲得
作者貢獻(xiàn)



本文編號(hào)：3766610