穩(wěn)定同位素標(biāo)記衍生化與液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用已成為蛋白質(zhì)和多肽類物質(zhì)分析的重要技術(shù)。目前最為廣泛應(yīng)用的技術(shù)莫過于基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記的一級質(zhì)譜相對定量方法。本文內(nèi)容包括對蛋白質(zhì)組學(xué)的研究技術(shù)以及蛋白質(zhì)組的相對定量分析方法進行簡述,還對照多篇蛋白質(zhì)組學(xué)研究現(xiàn)狀的國內(nèi)外文獻。通過1-(5-氟-2,4-二硝基-苯基)-4-甲基哌嗪(PPZ)和碘甲烷的甲基化合成d0-MPPZ;d4-MPPZ;d8-MPPZ。我們開發(fā)的這種超過四重標(biāo)記的衍生化試劑,通過結(jié)合使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進行多種不同類別的多肽定量分析。該衍生化試劑每相鄰兩個輕/重標(biāo)記的質(zhì)量差相差4 Da,這是由不同的13C和D同位素標(biāo)記而來。因衍生化試劑自帶+1電荷,使得標(biāo)記后的分析物在減輕電噴霧電離所固有的定量障礙,特別有利于抗電荷或低豐度的分析物。設(shè)計合成出的三種衍生化試劑通過使用核磁共振氫/碳譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等手段對其結(jié)構(gòu)進行表征。因該衍生化試劑有反應(yīng)活性大、離子化能力強和降低待測物最低檢測限等優(yōu)點,故結(jié)合高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用對多肽進行定量分析研究并優(yōu)化了最佳衍生化條件和質(zhì)譜參數(shù)。衍生化標(biāo)記之后改變分析物的物理性質(zhì),顯著改善極性...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 蛋白質(zhì)組學(xué)
    1.2 蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)
        1.2.1 研究前景
        1.2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)的質(zhì)譜技術(shù)
        1.2.3 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)
        1.2.4 穩(wěn)定同位素標(biāo)記技術(shù)
    1.3 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.4 本課題的立題依據(jù)及研究意義
第二章 實驗部分
    2.1 引言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 試劑與儀器
        2.2.2 衍生化試劑的合成及其表征
            2.2.2.1 1-(5-氟-2,4-二硝基-苯基)-4-甲基哌嗪(PPZ)的合成
            2.2.2.2 d₀-MPPZ的合成
            2.2.2.3 d₄-MPPZ的合成
            2.2.2.4 d₈-MPPZ的合成
    2.3 本章小結(jié)
第三章 穩(wěn)定同位素標(biāo)記衍生化-LC-MS分析多肽
    3.1 引言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 儀器與試劑
        3.2.2 樣品溶液配制
        3.2.3 衍生化反應(yīng)
        3.2.4 HPLC-UV檢測條件
        3.2.5 LC-MS 檢測餅
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 MPPZ與多肽的衍生化反應(yīng)條件優(yōu)化
            3.3.1.1 不同的緩沖體系對衍生化反應(yīng)效率的影響
            3.3.1.2 衍生化反應(yīng)時間的優(yōu)化
            3.3.1.3 衍生化反應(yīng)溫度的優(yōu)化
            3.3.1.4 衍生化反應(yīng)試劑與衍生化反應(yīng)目標(biāo)物的摩爾比優(yōu)化
        3.3.2 色譜條件的優(yōu)化
            3.3.2.1 最佳紫外波長的確定
            3.3.2.2 色譜分析中固定相的選擇
            3.3.2.3 色譜分析中流動相體系的確定
            3.3.2.4 最佳色譜條件的確立
            3.3.2.5 多肽β-Casomorphin(1-5)(bovine)的HPLC分析
            3.3.2.6 多肽Rrepro VIP(156-170)(human)的HPLC/LC-MS分析
    3.4 穩(wěn)定同位素標(biāo)記法分析多肽
        3.4.1 d₀/d₈-MPPZ分析多肽
        3.4.2 線性關(guān)系與動態(tài)范圍
        3.4.3 最低檢測限
    3.5 本章小結(jié)
第四章 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄A
附錄B



本文編號：3746479