發(fā)布時間：2023-02-10 16:42

　　細(xì)胞色素P450是植物中家族成員最多的一類酶蛋白,在參與脅迫反應(yīng)與植物的生物合成途徑中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。到目前為止,在水稻、擬南芥、煙草以及黑色三角葉楊等植物中有相關(guān)報道,目前關(guān)于蘋果P450的功能報道很少,有許多的功能研究還不是很清楚。本研究從‘寒富’蘋果中克隆出細(xì)胞色素P450 CYP716B1-like基因的全長,分別構(gòu)建了其過表達(dá)載體與沉默載體,通過遺傳轉(zhuǎn)化得到了蘋果轉(zhuǎn)基因植株,并通過分析其轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),獲得許多差異表達(dá)的基因,為揭示蘋果CYP716B1-like基因的功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:(1)利用RT-PCR技術(shù)從‘寒富’蘋果中克隆出MdCYP716B1-like基因序列。亞細(xì)胞定位試驗證明MdCYP716B1-like定位在葉綠體中。(2)利用qRT-PCR方法檢測了‘寒富’二倍體蘋果與其同源四倍體蘋果不同組織器官中MdCYP716B1-like基因的相對表達(dá)量,在‘寒富’二倍體根中的表達(dá)量最高,莖、花、果相對次之,在葉中表達(dá)量最少;在其同源四倍體中,MdCYP716B1-like基因在果中的表達(dá)量最高,根與莖的表達(dá)量基本相同,在花與葉中表達(dá)量最低。(3)分析MdC...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 植物抗病相關(guān)研究
        1.1.1 植物抗病機(jī)制
        1.1.2 植物免疫系統(tǒng)
        1.1.3 植物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
    1.2 植物細(xì)胞色素P450 研究進(jìn)展
        1.2.1 細(xì)胞色素P450 命名與分類
        1.2.2 細(xì)胞色素P450 的功能研究
        1.2.3 CYP716 家族研究進(jìn)展
    1.3 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用
    1.4 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
    2.2 試驗方法
        2.2.1 植物核酸的提取與檢測
        2.2.2 基因的克隆與表達(dá)分析
        2.2.3 亞細(xì)胞定位
        2.2.4 蘋果MdCYP716B1-like基因過表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.5 蘋果MdCYP716B1-like基因RNAi干擾載體構(gòu)建
        2.2.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化蘋果‘GL-3’葉片
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        2.2.8 在激素處理下MdCYP716B1-like基因的表達(dá)分析
        2.2.9 文庫的構(gòu)建及轉(zhuǎn)錄組測序
        2.2.10 差異基因片段的分析
        2.2.11 轉(zhuǎn)基因植株的抗病性檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 蘋果MdCYP716B1-like基因的克隆與分析
        3.1.1 蘋果MdCYP716B1-like基因的克隆
        3.1.2 MdCYP716B1-like的進(jìn)化分析
        3.1.3 MdCYP716B1-like氨基酸結(jié)構(gòu)域分析
    3.2 蘋果MdCYP716B1-like基因的組織特異性表達(dá)
    3.3 MdCYP716B1-like的亞細(xì)胞定位
    3.4 MdCYP716B1-like啟動子分析
    3.5 蘋果MdCYP716B1-like基因的遺傳轉(zhuǎn)化分析
        3.5.1 蘋果MdCYP716B1-like基因過表達(dá)載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.5.2 蘋果MdCYP716B1-like基因RNAi載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.5.3 獲得蘋果轉(zhuǎn)基因植株
        3.5.4 蘋果轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
    3.6 MdCYP716B1-like在蘋果中的功能驗證
        3.6.1 激素脅迫處理
        3.6.2 蘋果炭疽菌脅迫處理
    3.7 過表達(dá)MdCYP716B1-like轉(zhuǎn)基因蘋果與‘GL-3’對照的轉(zhuǎn)錄組測序
        3.7.1 測序質(zhì)量評估
        3.7.2 差異基因的分析
        3.7.3 Gene Ontology功能顯著性富集分析
        3.7.4 KEGG通路顯著富集分析
        3.7.5 植物差異基因的篩選分析
        3.7.6 差異基因的檢測與驗證
4 討論
    4.1 MdCYP716B1-like基因參與植物免疫
    4.2 MdCYP716B1-like基因參與植物三萜類化合物合成
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3739533