CRISPR多基因編輯系統(tǒng)在動植物中已被廣泛應(yīng)用。為了在乳腺癌細胞中構(gòu)建一套多基因編輯系統(tǒng),利用內(nèi)源性tRNA自剪切特點,將tRNA與小向?qū)NA(sgRNA)進行串聯(lián)組合實現(xiàn)基因編輯,并在MCF7乳腺癌細胞中對KLF4、MYC、SOX2和OCT4 4個轉(zhuǎn)錄因子同時調(diào)控,在基因水平、蛋白表達以及功能改變3個層次驗證該多基因編輯系統(tǒng)的功能性與可靠性。實驗結(jié)果顯示被調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子在細胞內(nèi)的表達量提高2倍以上,侵襲能力明顯增強,細胞的存活率提高50%,干細胞比例由2.57%提高到18.5%。同時,該系統(tǒng)在SUM149PT細胞系也被驗證成功。綜上,一套基于CRISPR的標準、精確、可復(fù)制、高效、可靠的多基因調(diào)控系統(tǒng)首次在乳腺癌細胞中構(gòu)建成功。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 多基因串聯(lián)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.2 細胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
        1.2.3 實時定量qPCR
        1.2.4 Western Blot檢測
        1.2.5 細胞遷移實驗
        1.2.6 細胞增殖實驗
        1.2.7 干細胞比例檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 CRISPR-dCas9多基因編輯系統(tǒng)的構(gòu)建
    2.2 qPCR與Western Blot結(jié)果分析
    2.3 MCF7細胞在基因編輯后增殖、遷移和干細胞比例的變化
3 討論與結(jié)論



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