【目的】利用木聚糖為輔助底物加強手性催化反應中的輔酶循環(huán),構(gòu)建來源于近平滑假絲酵母(Candida parapsilosis) CCTCC M203011的(S)-羰基還原酶Ⅱ(SCRⅡ)、枯草芽孢桿菌(Bacillus sp.) YX-1葡萄糖脫氫酶突變體Ala258Phe/GDH和里氏木霉(Trichoderma reesei)RutC-30木聚糖酶(XYN2)在大腸桿菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中的融合表達體系,高效合成(S)-苯乙二醇。【方法】調(diào)節(jié)3種酶編碼基因在pET-28a載體上的位置,運用重疊延伸PCR技術(shù),構(gòu)建了E.coli/pET-SCRⅡ-A258F-XYN2和E. coli/pET-A258F-SCRⅡ-XYN2兩種重組菌,研究了其合成(S)-苯乙二醇的最適反應條件�！窘Y(jié)果】重組菌株E.coli/pET-SCRⅡ-A258F-XYN2在底物2-羥基苯乙酮與輔助底物木聚糖的比例為1:1、35℃、pH為7.0條件下,(S)-苯乙二醇的產(chǎn)率達98.8%(W/W);而重組菌株E. coli/pET-A258F-SCRⅡ-XYN2在底物與輔助底...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒：
        1.1.2 主要試劑和儀器：
    1.2 融合表達質(zhì)粒和重組菌株構(gòu)建
    1.3 菌體的表達與純化
    1.4 酶活力的測定
    1.5 不對稱還原反應及其檢測
    1.6 溫度和p H對多酶融合表達催化轉(zhuǎn)化(S)-苯乙二醇的影響
    1.7 底物與輔助底物之間配比對轉(zhuǎn)化(S)-苯乙二醇的影響
2 結(jié)果和分析
    2.1 重組菌株的構(gòu)建
    2.2 重組菌株的表達與純化
    2.3 重組菌株的酶活測定
    2.4 融合表達體系催化轉(zhuǎn)化(S)-苯乙二醇的最適溫度和p H
    2.5 底物與輔助底物配比對催化轉(zhuǎn)化(S)-苯乙二醇的影響
    2.6 融合表達體系轉(zhuǎn)化(S)-苯乙二醇時間
3 討論



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