中國(guó)鹵蟲(chóng)是一種生活在高鹽環(huán)境中的甲殼動(dòng)物,在不良條件下,鹵蟲(chóng)會(huì)出現(xiàn)滯育現(xiàn)象。當(dāng)環(huán)境條件有利于原腸胚發(fā)育時(shí),鹵蟲(chóng)的發(fā)育重新開(kāi)始。血清反應(yīng)因子（SRF）是一種高度保守的順式作用因子,是MADS轉(zhuǎn)錄因子超家族的成員之一,SRF能與許多基因啟動(dòng)子中的調(diào)節(jié)元件結(jié)合。SRF促進(jìn)中胚層細(xì)胞遷移,在胚胎體軸延長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用,對(duì)胚胎發(fā)育至關(guān)重要。該蛋白質(zhì)能夠調(diào)節(jié)許多早期基因（例如c-fos）的活性,從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、凋亡、生長(zhǎng)和分化。但對(duì)于SRF在解除滯育過(guò)程中的作用機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)RACE技術(shù),克隆得出As-srf的全長(zhǎng)c DNA序列,As-srf的序列全長(zhǎng)為1223bp,其中包括開(kāi)放閱讀框912bp,149bp的3’-UTR和162bp的5’UTR,共編碼303個(gè)氨基酸,其蛋白分子量約為34KDa,該蛋白為親水性蛋白,等電點(diǎn)為6.32;通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示As-SRF在中國(guó)鹵蟲(chóng)身體各部分均有表達(dá),表明此蛋白沒(méi)有組織和器官特異性;而后又通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量q PCR和Western Bloting結(jié)果證明As-srf和As-SRF的表達(dá)水平基本一致,在發(fā)育到0-20h內(nèi)表達(dá)量在增加,20h以... 

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 中國(guó)鹵蟲(chóng)
        1.1.1 中國(guó)鹵蟲(chóng)的特征及價(jià)值
        1.1.2 中國(guó)鹵蟲(chóng)的滯育現(xiàn)象
    1.2 SRF蛋白的研究
        1.2.1 SRF的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及功能
        1.2.2 SRF上下游相關(guān)調(diào)控蛋白
    1.3 本研究的目的及意義
2.材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 鹵蟲(chóng)的孵化及培養(yǎng)
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 主要設(shè)備儀器
    2.2 方法
        2.2.1 鹵蟲(chóng)總RNA提取
        2.2.2 反轉(zhuǎn)cDNA模板
        2.2.3 基因片段的擴(kuò)增
        2.2.4 cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的回收純化與克隆
        2.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.2.7 As-SRF原核表達(dá)
        2.2.8 As-SRF大量誘導(dǎo)及純化
        2.2.9 免疫印跡試驗(yàn)
        2.2.10 免疫熒光
        2.2.11 siRNA干擾
    2.3 生物信息學(xué)和生物統(tǒng)計(jì)分析
3.結(jié)果
    3.1 As-srf基因全長(zhǎng)的克隆
        3.1.1 As-srf EST片段的獲得
        3.1.2 As-srf基因3’端序列的獲得
        3.1.3 As-srf 5’端序列的獲得
        3.1.4 As-srf c DNA全長(zhǎng)序列
    3.2 As-SRF生物信息學(xué)分析
    3.3 As-SRF分子進(jìn)化分析
    3.4 As-srf表達(dá)模式
        3.4.1 不同胚胎發(fā)育時(shí)期As-srf的相對(duì)表達(dá)量
        3.4.2 .不同鹽度刺激下As-srf的相對(duì)表達(dá)量
        3.4.3 低溫刺激下As-srf的相對(duì)表達(dá)量
    3.5 As-SRF重組蛋白的純化
        3.5.1 As-SRF重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.5.2 檢測(cè)As-SRF重組蛋白可溶性
        3.5.3 As-SRF重組蛋白的純化
    3.6 Western blot
        3.6.1 在中國(guó)鹵蟲(chóng)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)
        3.6.2 在低溫刺激下的表達(dá)
        3.6.3 在高鹽刺激下的表達(dá)
    3.7 As-SRF的免疫熒光分析
    3.8 As-srf的 si RNA
4.討論
    4.1 中國(guó)鹵蟲(chóng)As-srf基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    4.2 As-SRF在中國(guó)鹵蟲(chóng)中的表達(dá)部位
    4.3 As-srf在中國(guó)鹵蟲(chóng)早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式
    4.4 As-srf在中國(guó)鹵蟲(chóng)鹽度、溫度脅迫應(yīng)答過(guò)程中的表達(dá)
    4.5 As-srf的功能
    4.6 As-SRF的調(diào)控過(guò)程
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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