中國鹵蟲是一種生活在高鹽環(huán)境中的甲殼動物,在不良條件下,鹵蟲會出現(xiàn)滯育現(xiàn)象。當環(huán)境條件有利于原腸胚發(fā)育時,鹵蟲的發(fā)育重新開始。血清反應(yīng)因子（SRF）是一種高度保守的順式作用因子,是MADS轉(zhuǎn)錄因子超家族的成員之一,SRF能與許多基因啟動子中的調(diào)節(jié)元件結(jié)合。SRF促進中胚層細胞遷移,在胚胎體軸延長中發(fā)揮重要作用,對胚胎發(fā)育至關(guān)重要。該蛋白質(zhì)能夠調(diào)節(jié)許多早期基因（例如c-fos）的活性,從而參與調(diào)節(jié)細胞周期、凋亡、生長和分化。但對于SRF在解除滯育過程中的作用機制尚不清楚。本研究通過RACE技術(shù),克隆得出As-srf的全長c DNA序列,As-srf的序列全長為1223bp,其中包括開放閱讀框912bp,149bp的3’-UTR和162bp的5’UTR,共編碼303個氨基酸,其蛋白分子量約為34KDa,該蛋白為親水性蛋白,等電點為6.32;通過免疫熒光實驗顯示As-SRF在中國鹵蟲身體各部分均有表達,表明此蛋白沒有組織和器官特異性;而后又通過實時熒光定量q PCR和Western Bloting結(jié)果證明As-srf和As-SRF的表達水平基本一致,在發(fā)育到0-20h內(nèi)表達量在增加,20h以... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 中國鹵蟲
        1.1.1 中國鹵蟲的特征及價值
        1.1.2 中國鹵蟲的滯育現(xiàn)象
    1.2 SRF蛋白的研究
        1.2.1 SRF的結(jié)構(gòu)特點及功能
        1.2.2 SRF上下游相關(guān)調(diào)控蛋白
    1.3 本研究的目的及意義
2.材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 鹵蟲的孵化及培養(yǎng)
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 主要設(shè)備儀器
    2.2 方法
        2.2.1 鹵蟲總RNA提取
        2.2.2 反轉(zhuǎn)cDNA模板
        2.2.3 基因片段的擴增
        2.2.4 cDNA末端快速擴增(RACE)
        2.2.5 PCR產(chǎn)物的回收純化與克隆
        2.2.6 實時熒光定量PCR
        2.2.7 As-SRF原核表達
        2.2.8 As-SRF大量誘導及純化
        2.2.9 免疫印跡試驗
        2.2.10 免疫熒光
        2.2.11 siRNA干擾
    2.3 生物信息學和生物統(tǒng)計分析
3.結(jié)果
    3.1 As-srf基因全長的克隆
        3.1.1 As-srf EST片段的獲得
        3.1.2 As-srf基因3’端序列的獲得
        3.1.3 As-srf 5’端序列的獲得
        3.1.4 As-srf c DNA全長序列
    3.2 As-SRF生物信息學分析
    3.3 As-SRF分子進化分析
    3.4 As-srf表達模式
        3.4.1 不同胚胎發(fā)育時期As-srf的相對表達量
        3.4.2 .不同鹽度刺激下As-srf的相對表達量
        3.4.3 低溫刺激下As-srf的相對表達量
    3.5 As-SRF重組蛋白的純化
        3.5.1 As-SRF重組蛋白的誘導表達
        3.5.2 檢測As-SRF重組蛋白可溶性
        3.5.3 As-SRF重組蛋白的純化
    3.6 Western blot
        3.6.1 在中國鹵蟲不同發(fā)育時期的表達
        3.6.2 在低溫刺激下的表達
        3.6.3 在高鹽刺激下的表達
    3.7 As-SRF的免疫熒光分析
    3.8 As-srf的 si RNA
4.討論
    4.1 中國鹵蟲As-srf基因的結(jié)構(gòu)特點
    4.2 As-SRF在中國鹵蟲中的表達部位
    4.3 As-srf在中國鹵蟲早期胚胎發(fā)育過程中的表達模式
    4.4 As-srf在中國鹵蟲鹽度、溫度脅迫應(yīng)答過程中的表達
    4.5 As-srf的功能
    4.6 As-SRF的調(diào)控過程
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]血清反應(yīng)因子在神經(jīng)再生中的作用[J]. 童靈犀,黃飛,張傳森.  神經(jīng)損傷與功能重建. 2015(06)
[2]Slug和SRF在食管癌中的表達及臨床意義[J]. 何喜,李偉,王志強.  河北醫(yī)藥. 2015(02)
[3]電穿孔法轉(zhuǎn)染293T細胞條件的優(yōu)化[J]. 劉曉娟,趙曉飛,曾貝妮,張萌,馬正海.  生物學通報. 2014(11)
[4]SRF在胃癌細胞中的表達及其意義[J]. 左靜,劉亮,趙敏,左連富.  中國腫瘤臨床. 2014(03)
[5]血清反應(yīng)因子參與單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化[J]. 婁未娟,何麗潔,孫文娟,李翠香,殷繼鵬,孫世仁,王漢民.  細胞與分子免疫學雜志. 2012(01)
[6]發(fā)育不同時期的中國鹵蟲總RNA提取方法[J]. 伊男,李楠.  安徽農(nóng)學通報(下半月刊). 2009(02)
[7]鹵蟲的生殖途徑和影響因素[J]. 鮑鷹,逄少軍.  海洋科學. 2007(02)
[8]中國鹵蟲actin基因的實時熒光定量PCR方法的建立和優(yōu)化[J]. 侯林,姜麗娟,孫文靜,張瑞鋒,王家慶,趙欣濤,安家璐.  遼寧師范大學學報(自然科學版). 2006(04)
[9]鹵蟲的生物學研究[J]. 侯林,鄒向陽,姚鋒.  生物學通報. 2005(07)
[10]Flow cytometric analysis of DNA,telomerase content and multi-gene expression in esophageal epithelial dysplasia[J]. Lian-Fu Zuo Jian-Wen Guo Jiang-Hui Liu, Hebei Provincial Tumor Institute, Shijiazhuang 050011, Hebei Province, China Pei-Zhong Lin, Department of Pathology, Tumor Institute, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100021,China Feng-Ying Qi, Department of Pathology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2003(11)

博士論文
[1]血清反應(yīng)因子在糖尿病腎病上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化中的作用及相關(guān)機制[D]. 趙龍.山東大學 2017

碩士論文
[1]SRF介導pol-miR-133a調(diào)控牙鲆肌肉發(fā)育的分子基礎(chǔ)研究[D]. 蘇艷芳.上海海洋大學 2015
[2]血清應(yīng)答因子（SRF）的協(xié)同進化研究[D]. 黃曉太.西北農(nóng)林科技大學 2011
[3]人類基因組中血清反應(yīng)因子（SRF）潛在順式作用元件搜索及其特征研究[D]. 李崢剛.西北農(nóng)林科技大學 2011
[4]去甲基化對結(jié)腸癌細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子的影響[D]. 蘇婧.中南大學 2010
[5]人胎胰島細胞培養(yǎng)與凋亡相關(guān)因子檢測及意義[D]. 王海慧.第三軍醫(yī)大學 2003



本文編號：3731088