副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,HPS）是一種定殖于豬上呼吸道的條件性致病菌,其感染引起的副豬嗜血桿菌病（也稱革拉瑟氏病,Gl?sser’s disease）主要以多發(fā)性纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎為特征,呈世界性分布。近年來,在PCV2、PRRSV、霉菌毒素等導(dǎo)致免疫抑制作用的“底色病”的影響下,副豬嗜血桿菌病的發(fā)病率和死亡率持續(xù)性上升,其流行呈上升趨勢,危害日漸嚴(yán)重。隨著抗生素的逐步禁用,疫苗接種和強(qiáng)化飼養(yǎng)管理將是今后預(yù)防和控制HPS感染的主要措施。由于HPS具有明顯的地方性流行特征,且血清型復(fù)雜,不同血清型菌株間的交叉保護(hù)性較低,因此分離鑒定不同地區(qū)感染流行的HPS菌株,不僅有利于全面了解該病的流行病學(xué)特征,還可以為該病的疫苗研究提供合適的候選菌株。因此,本研究對2018～2019年來自貴州省部分區(qū)縣送檢的14份HPS陽性樣品進(jìn)行了HPS的分離與鑒定,并對分離鑒定純化的菌株進(jìn)行了部分生物學(xué)特性研究,旨在豐富貴州省HPS感染流行菌株的流行病學(xué)資料,為進(jìn)一步開展HPS的病原學(xué)及疫苗研究奠定基礎(chǔ)。相關(guān)研究內(nèi)容如下:1.HPS的分離與鑒定實(shí)驗(yàn)首先對貴州省部分區(qū)縣2018... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 HPS病原學(xué)
    2 HPS診斷方法研究
    3 HPS生物學(xué)特性研究
        3.1 菌體形態(tài)學(xué)
        3.2 分離鑒定與培養(yǎng)特性
    4 HPS血清型研究
        4.1 血清學(xué)分型
        4.2 分子生物學(xué)分型
    5 HPS毒力基因研究進(jìn)展
        5.1 HPS的致病性
        5.2 毒力因子的鑒定
    6 HPS耐藥性研究
    7 HPS疫苗研究
        7.1 HPS滅活疫苗
        7.2 HPS亞單位疫苗
        7.3 DNA疫苗
    8 研究目的及意義
第二章 副豬嗜血桿菌的分離鑒定
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 病料來源
        1.2 主要試劑及培養(yǎng)基
        1.3 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 送檢樣品的HPS檢測
            2.1.1 HPS16s rRNA檢測引物合成
            2.1.2 送檢樣品的增菌培養(yǎng)
            2.1.3 細(xì)菌核酸提取
            2.1.4 HPS16S rRNA PCR擴(kuò)增
            2.1.5 HPS16S rRNA PCR產(chǎn)物測序
        2.2 HPS陽性樣品混合感染病原檢測
            2.2.1 引物合成
            2.2.2 HPS陽性組織樣品的預(yù)處理
            2.2.3 HPS陽性樣品的核酸提取
            2.2.4 HPS陽性樣品中PCV2、PRRSV、CSFV的檢測
        2.3 HPS分離純化
        2.4 革蘭氏染色
        2.5 衛(wèi)星試驗(yàn)
        2.6 生化試驗(yàn)
        2.7 HPS16S rRNA PCR擴(kuò)增序列鑒定序列鑒定
        2.8 HPS16S rRNA PCR擴(kuò)增序列對比分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 送檢樣品的HPS檢測PCR檢測結(jié)果
        3.2 HPS16S rRNA PCR產(chǎn)物測序結(jié)果與分析
            3.2.1 HPS16S rRNA PCR產(chǎn)物測序結(jié)果
            3.2.2 14份HPS16S rRNA核苷酸序列相似性分析
            3.2.3 14株HPS菌株與其他HPS菌株16S rRNA核苷酸序列相似性分析
            3.2.4 14株HPS菌株基因組與其他HPS菌株遺傳進(jìn)化分析
            3.2.5 14株HPS菌株與其他HPS菌株核苷酸和氨基酸序列分析
        3.3 HPS陽性樣品中PCV2、PRRSV、CSFV的檢測
            3.3.1 PCV2檢測結(jié)果
            3.3.2 PRRSV檢測結(jié)果
            3.3.3 CSFV檢測結(jié)果
        3.4 3株HPS分離純化菌株的菌落特征
        3.5 3株HPS分離純化菌株的革蘭氏染色結(jié)果
        3.6 衛(wèi)星試驗(yàn)
        3.7 生化試驗(yàn)
        3.8 HPS16S rRNA PCR擴(kuò)增序列鑒定序列鑒定
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 3株HPS貴州分離菌株的部分生物學(xué)特性研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 菌株
        1.2 主要試劑及培養(yǎng)基
        1.3 主要儀器設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 HPS分離菌株NAD依賴性測定
            2.1.1 不同NAD濃度對HPS分離株的影響
            2.1.2 同一NAD濃度中不同時(shí)間段HPS分離菌株生長觀察
        2.2 HPS分離菌株的血清型鑒定
            2.2.1 HPS血清型PCR鑒定引物的合成
            2.2.2 HPS分離菌株血清型PCR鑒定
        2.3 HPS分離菌株毒力基因檢測
        2.4 HPS分離菌株培養(yǎng)特性研究
        2.5 HPS分離菌株耐藥性試驗(yàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 HPS分離菌株NAD依賴性測定
            3.1.1 不同NAD濃度對HPS分離株的影響測定結(jié)果
            3.1.2 同一NAD濃度中不同時(shí)間段HPS分離菌株生長測定結(jié)果
        3.2 HPS分離菌株的血清型鑒定結(jié)果
        3.3 HPS分離菌株毒力基因PCR測定
        3.4 HPS分離菌株培養(yǎng)特性研究
        3.5 HPS分離菌株耐藥性試驗(yàn)結(jié)果
    4 討論
    5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄一 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]副豬嗜血桿菌耐藥性調(diào)查和耐藥機(jī)制研究[D]. 劉英玉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]副豬嗜血桿菌三價(jià)滅活疫苗的制備及免疫效果研究[D]. 秦曉航.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]浙江省副豬嗜血桿菌血清型調(diào)查和IscR對莢膜多糖合成相關(guān)基因表達(dá)的影響[D]. 江軍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌、沙門氏菌DNAH和LAMP檢測方法的建立[D]. 劉亞娟.西南大學(xué) 2016
[4]副豬嗜血桿菌陜西株的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[D]. 梁留存.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號：3728348