發(fā)布時(shí)間：2022-12-25 17:02

　　在小鼠胚胎干細(xì)胞中添加細(xì)胞白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor,LIF）能夠觸發(fā)STAT3蛋白上第705位的酪氨酸的磷酸化,此位點(diǎn)的磷酸化可以激活STAT3,促使STAT3進(jìn)入到細(xì)胞核內(nèi),從而與它靶基因結(jié)合并激活它們的表達(dá),最終維持小鼠胚胎干細(xì)胞（mouse embryonic stem cells mESCs）的自我更新?tīng)顟B(tài);此外,很多研究者們也都發(fā)現(xiàn)將STAT3及其靶基因過(guò)表達(dá)后,在添加LIF,CHIR99021和PD0325901的條件下,能夠?qū)⒎蛛x自著床后的小鼠上胚層干細(xì)胞（Epiblast stem cells,EpiSCs）誘導(dǎo)重編程回到mESCs狀態(tài)。STAT3主要在經(jīng)典通路Janus途徑中發(fā)揮作用,所以STAT3蛋白第705位的酪氨酸的磷酸化是主要通過(guò)Janus激酶途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。雖然目前關(guān)于STAT3基因在mESCs中的功能雖然有很多報(bào)道,但與其相互作用的蛋白的卻未鑒定出來(lái)。過(guò)表達(dá)STAT3可以替代LIF的功能,從而維持mESCs在未分化狀態(tài),我們的研究發(fā)現(xiàn):在過(guò)表達(dá)基因STAT3的細(xì)胞系中上調(diào)PTPN2（protein tyrosine... 

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 胚胎早期發(fā)育
    1.2 胚胎干細(xì)胞
    1.3 胚胎干細(xì)胞的研究進(jìn)展
    1.4 LIF/STAT3信號(hào)通路
    1.5 蛋白酪氨酸磷酸酶家族(ProteinTyrosine Phosphatase,PTP家族)
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所需儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 小鼠胚胎干細(xì)胞和上胚層干細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞
        2.2.4 293FT細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.5 病毒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的敲低方法
        2.2.6 小鼠胚胎干細(xì)胞堿性磷酸酶(AP)活性的檢測(cè)
        2.2.7 蛋白質(zhì)印跡(免疫印跡實(shí)驗(yàn),Western bloting)
        2.2.8 免疫共沉淀(CO-IP)
        2.2.9 免疫螢光染色
        2.2.10 定量RT-PCR(qRT-PCR)
        2.2.11 小鼠胚胎干細(xì)胞的凍存
        2.2.12 小鼠胚胎干細(xì)胞的復(fù)蘇
        2.2.13 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1. 小鼠胚胎干細(xì)胞mESCs中STAT3相互作用蛋白的鑒定
        3.1.1 PTPN2被篩選出可能與STAT3存在相互作用
        3.1.2 PTPN2與STAT3蛋白間互相作用的驗(yàn)證
    3.2 過(guò)表達(dá)的PTPN2是通過(guò)降低STAT3pY705來(lái)促進(jìn)mESC的分化
        3.2.1 過(guò)表達(dá)PTPN2對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞多能性基因的影響
        3.2.2 PTPN2的過(guò)表達(dá)對(duì)STAT3磷酸化的影響
        3.2.3 PTPN2與STAT3蛋白的結(jié)合主要發(fā)生在在細(xì)胞核
    3.3 降低PTPN2的表達(dá)能夠延遲小鼠胚胎干細(xì)胞的分化
        3.3.1 敲低PTPN2的表達(dá)對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞的影響
        3.3.2 敲除PTPN2的表達(dá)對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞的影響
    3.4 在過(guò)表達(dá)STAT3的上胚層干細(xì)胞中抑制PTPN2基因的表達(dá)可以促進(jìn)上胚層干細(xì)胞的重編程
        3.4.1 在小鼠上胚層干細(xì)胞中降低PTPN2的含量對(duì)STAT3介導(dǎo)的重編程能力的影響
        3.4.2 在小鼠上胚層干細(xì)胞中過(guò)表達(dá)PTPN2的含量對(duì)STAT3介導(dǎo)的重編程能力的影響
第四章 討論與展望
    4.1 討論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
附圖
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3727008