在小鼠胚胎干細胞中添加細胞白血病抑制因子（Leukemia Inhibitory Factor,LIF）能夠觸發(fā)STAT3蛋白上第705位的酪氨酸的磷酸化,此位點的磷酸化可以激活STAT3,促使STAT3進入到細胞核內(nèi),從而與它靶基因結(jié)合并激活它們的表達,最終維持小鼠胚胎干細胞（mouse embryonic stem cells mESCs）的自我更新狀態(tài);此外,很多研究者們也都發(fā)現(xiàn)將STAT3及其靶基因過表達后,在添加LIF,CHIR99021和PD0325901的條件下,能夠?qū)⒎蛛x自著床后的小鼠上胚層干細胞（Epiblast stem cells,EpiSCs）誘導(dǎo)重編程回到mESCs狀態(tài)。STAT3主要在經(jīng)典通路Janus途徑中發(fā)揮作用,所以STAT3蛋白第705位的酪氨酸的磷酸化是主要通過Janus激酶途徑來實現(xiàn)的。雖然目前關(guān)于STAT3基因在mESCs中的功能雖然有很多報道,但與其相互作用的蛋白的卻未鑒定出來。過表達STAT3可以替代LIF的功能,從而維持mESCs在未分化狀態(tài),我們的研究發(fā)現(xiàn):在過表達基因STAT3的細胞系中上調(diào)PTPN2（protein tyrosine... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 胚胎早期發(fā)育
    1.2 胚胎干細胞
    1.3 胚胎干細胞的研究進展
    1.4 LIF/STAT3信號通路
    1.5 蛋白酪氨酸磷酸酶家族(ProteinTyrosine Phosphatase,PTP家族)
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗所需儀器
        2.1.2 實驗所需試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠胚胎干細胞和上胚層干細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 過表達質(zhì)粒導(dǎo)入細胞
        2.2.4 293FT細胞的培養(yǎng)
        2.2.5 病毒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的敲低方法
        2.2.6 小鼠胚胎干細胞堿性磷酸酶(AP)活性的檢測
        2.2.7 蛋白質(zhì)印跡(免疫印跡實驗,Western bloting)
        2.2.8 免疫共沉淀(CO-IP)
        2.2.9 免疫螢光染色
        2.2.10 定量RT-PCR(qRT-PCR)
        2.2.11 小鼠胚胎干細胞的凍存
        2.2.12 小鼠胚胎干細胞的復(fù)蘇
        2.2.13 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
第三章 實驗結(jié)果
    3.1. 小鼠胚胎干細胞mESCs中STAT3相互作用蛋白的鑒定
        3.1.1 PTPN2被篩選出可能與STAT3存在相互作用
        3.1.2 PTPN2與STAT3蛋白間互相作用的驗證
    3.2 過表達的PTPN2是通過降低STAT3pY705來促進mESC的分化
        3.2.1 過表達PTPN2對小鼠胚胎干細胞多能性基因的影響
        3.2.2 PTPN2的過表達對STAT3磷酸化的影響
        3.2.3 PTPN2與STAT3蛋白的結(jié)合主要發(fā)生在在細胞核
    3.3 降低PTPN2的表達能夠延遲小鼠胚胎干細胞的分化
        3.3.1 敲低PTPN2的表達對小鼠胚胎干細胞的影響
        3.3.2 敲除PTPN2的表達對小鼠胚胎干細胞的影響
    3.4 在過表達STAT3的上胚層干細胞中抑制PTPN2基因的表達可以促進上胚層干細胞的重編程
        3.4.1 在小鼠上胚層干細胞中降低PTPN2的含量對STAT3介導(dǎo)的重編程能力的影響
        3.4.2 在小鼠上胚層干細胞中過表達PTPN2的含量對STAT3介導(dǎo)的重編程能力的影響
第四章 討論與展望
    4.1 討論
    4.2 展望
參考文獻
附圖
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文



本文編號：3727008