本試驗(yàn)以食源性病原菌（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和腸炎沙門(mén)氏菌）形成的單一菌和混合菌生物被膜為研究對(duì)象,研究了影響生物被膜形成的因素,并通過(guò)Real Time PCR方法分別檢測(cè)單一菌和混合菌生物被膜中的金黃色葡萄球菌28種目的毒素因子轉(zhuǎn)錄水平的變化。得到如下結(jié)果:（1）結(jié)晶紫染色法、銀染法和掃描電鏡法均證明混合菌在培養(yǎng)24h時(shí)達(dá)到最大黏附度;混合菌生物被膜中的三種細(xì)菌的活菌數(shù)目均低于其單菌生物被膜中的數(shù)目;金黃色葡萄球菌在混合菌生物被膜中為優(yōu)勢(shì)菌。（2）以96孔微量板作為單一菌和混合菌生物被膜的黏附載體,通過(guò)結(jié)晶紫染色法測(cè)定了影響生物被膜的形成因素。①混合菌生物被膜的最佳培養(yǎng)基pH值為7.0,培養(yǎng)溫度36℃,培養(yǎng)時(shí)間21 h;采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.6%的TSB培養(yǎng)基時(shí),病原菌在最佳條件下形成的生物被膜黏附率最大;碳源促進(jìn)了生物被膜的形成;NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于0.4%時(shí),食源性病原菌生物被膜的形成能力受到一定抑制。②化學(xué)防腐劑（EDTA）對(duì)混合菌生物被膜有抑制作用,且隨著EDTA質(zhì)量濃度的增加,混合菌生物被膜的黏附度逐漸降低,當(dāng)添加0.25 mmol/L的EDTA時(shí)即可使混合菌生物被膜黏附率... 

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 生物被膜的概述
        1.1.1 生物被膜定義及特點(diǎn)
        1.1.2 生物被膜的形成
        1.1.3 生物膜內(nèi)菌種間的相互作用
        1.1.4 生物被膜對(duì)食品安全的影響
    1.2 控制生物被膜的方法
        1.2.1 化學(xué)防腐劑
        1.2.2 生物防腐劑
    1.3 群體感應(yīng)機(jī)制
        1.3.1 群體感應(yīng)的概念
        1.3.2 群體感應(yīng)系統(tǒng)
    1.4 金黃色葡萄球菌的毒素因子
    1.5 課題的研究目的和內(nèi)容
        1.5.1 課題研究的目的
        1.5.2 課題研究的內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 食源性病原菌生物被膜的建立
        2.2.2 食源性混合病原菌生物被膜的鑒定
        2.2.3 混合菌生物被膜最佳培養(yǎng)條件的確定
        2.2.4 營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)病原菌生物被膜形成的影響
        2.2.5 EDTA對(duì)混合病原菌生物被膜形成的影響
        2.2.6 乳桿菌產(chǎn)抑菌物質(zhì)對(duì)生物被膜及群體感應(yīng)信號(hào)分子的作用
        2.2.7 混合菌和單一菌生物被膜中金黃色葡萄球菌毒素因子表達(dá)量的差異
3 結(jié)果與討論
    3.1 食源性混合病原菌生物被膜的鑒定
        3.1.1 食源性混合病原菌生物被膜的定性檢測(cè)
            3.1.1.1 銀染法(AgNO_3)對(duì)混合菌生物被膜形成能力的檢測(cè)
            3.1.1.2 掃描電鏡(SEM)對(duì)混合菌生物被膜形成能力的檢測(cè)
        3.1.2 食源性混合病原菌生物被膜的定量檢測(cè)
            3.1.2.1 結(jié)晶紫染色法對(duì)混合菌生物被膜量的檢測(cè)
            3.1.2.2 病原菌生物被膜的活菌數(shù)檢測(cè)
        3.1.3 單一菌和混合菌生物被膜黏附率的對(duì)比
    3.2 影響食源性混合病原菌生物被膜形成因素的研究
        3.2.1 培養(yǎng)條件對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.1.1 培養(yǎng)基pH值對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.1.2 培養(yǎng)溫度對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.1.3 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.1.4 響應(yīng)面法優(yōu)化混合菌生物被膜最佳培養(yǎng)條件
        3.2.2 營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.2.1 培養(yǎng)基質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.2.2 NaCl質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.2.3 葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)混合菌生物被膜黏附率的影響
        3.2.3 化學(xué)防腐劑(EDTA)對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.3.1 EDTA濃度對(duì)生物被膜形成的影響
            3.2.3.2 二價(jià)陽(yáng)離子對(duì)混合菌生物被膜形成的影響
            3.2.3.3 不同濃度EDTA對(duì)混合菌AI-2活性的影響
        3.2.4 乳桿菌產(chǎn)抑菌物對(duì)生物被膜黏附率的影響
            3.2.4.1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
            3.2.4.2 牛津杯法測(cè)定抑菌活性
            3.2.4.3 乳桿菌產(chǎn)抑菌物質(zhì)對(duì)單一菌和混合菌生物被膜形成的影響
            3.2.4.4 乳桿菌產(chǎn)抑菌物質(zhì)對(duì)病原菌AI-2活性的影響
    3.3 混合菌和單一菌生物被膜中金黃色葡萄球菌毒素因子表達(dá)量的差異
        3.3.1 RNA電泳圖
        3.3.2 熒光定量PCR相對(duì)定量轉(zhuǎn)錄量
4 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
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