男性不育在全球廣泛分布。我國(guó)男性不育發(fā)病率高達(dá)10%,僅次于心血管疾病和腫瘤。當(dāng)前,評(píng)價(jià)男性生殖能力的常用方法是采用CASA系統(tǒng)檢測(cè)精子的密度,形態(tài),活力等參數(shù),25%不育患者的精子符合以上正常精液參數(shù),這部分病例被命名為不明原因的不育病例（UMI）。在這些病例中,絲氨酸蛋白酶的缺失十分常見(jiàn)。睪丸特異性表達(dá)的絲氨酸蛋白酶家族是小鼠睪丸中最大的蛋白酶家族,且很多報(bào)道表明,多種絲氨酸蛋白酶對(duì)雄性小鼠的生殖能力發(fā)揮著必需的作用。有研究發(fā)現(xiàn),屬于絲氨酸蛋白酶家族的胰蛋白酶樣因子TRYX5特異性表達(dá)于小鼠精子頂體,精原細(xì)胞系的高爾基體及生精細(xì)胞中,但TRYX5的生理功能還鮮有報(bào)道。為探討TRYX5在雄性生殖方面的生理功能,本研究通過(guò)建立Tryx5的基因敲除小鼠模型,并通過(guò)探究該小鼠雄性生殖方面的表型,及控制這一表型的分子機(jī)制,以了解TRYX5影響雄性生殖的分子機(jī)理,為探尋可以治療UMI患者的藥物靶標(biāo)及男性避孕提供理論參考。1.Tryx5在小鼠睪丸等組織的表達(dá)規(guī)律為進(jìn)一步探討Tryx5的表達(dá)規(guī)律,首先,通過(guò)q RT-PCR的方法,檢測(cè)小鼠不同組織及不同階段小鼠睪丸中Tryx5 m RNA的表達(dá)模式... 

【文章頁(yè)數(shù)】：129 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 雄性生殖系統(tǒng)概述
        1.1.1 睪丸生殖細(xì)胞
        1.1.2 支持細(xì)胞
        1.1.3 附睪
    1.2 精子在雌性生殖道的運(yùn)行
        1.2.1 影響精子在子宮中狀態(tài)的蛋白
        1.2.2 影響精子通過(guò)子宮輸卵管連接處的因素
        1.2.3 精子在輸卵管中的運(yùn)行
    1.3 精卵識(shí)別與融合
    1.4 絲氨酸蛋白酶與雄性生殖
        1.4.1 絲氨酸蛋白酶參與調(diào)控小鼠精子發(fā)生過(guò)程
        1.4.2 絲氨酸蛋白酶參與調(diào)控小鼠精子在雌性生殖道中的運(yùn)行
        1.4.3 絲氨酸蛋白酶參與調(diào)控精子穿透明帶和精卵融合
    1.5 研究目的和意義
第二章 研究論文 胰蛋白酶樣因子TRYX5在雄性小鼠生殖中的功能研究
    前言
    1 試驗(yàn)材料與方法
        1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 主要儀器和試劑
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 q RT-PCR
            1.2.2 兔源多克隆抗體的制備
            1.2.3 蛋白免疫印跡(Western Blotting)
            1.2.4 梯度密度離心法分離小鼠S12-16期長(zhǎng)形精子
            1.2.5 睪丸生殖細(xì)胞的Hoechst33342 流式細(xì)胞分選
            1.2.6 免疫熒光(Immunoflurescence)
            1.2.7 Tryx5-EGFP和 Tryx5 敲除小鼠的制作
            1.2.8 敲除小鼠的表型分析
            1.2.9 蛋白免疫沉淀實(shí)驗(yàn)(IP)
            1.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    2 試驗(yàn)結(jié)果
        2.1 Tryx5 在小鼠中m RNA水平的表達(dá)規(guī)律
        2.2 TRYX5兔多克隆抗體的制備和蛋白水平的表達(dá)規(guī)律
            2.2.1 TRYX5兔多克隆抗體的制備
            2.2.2 TRYX5蛋白水平的表達(dá)規(guī)律
        2.3 Tryx5-EGFP小鼠的制作
        2.4 Tryx5敲除小鼠的制作
        2.5 Tryx5敲除小鼠的表型分析
            2.5.1 繁殖能力檢測(cè)
            2.5.2 組織形態(tài)學(xué)分析
            2.5.3 小鼠精子活力
            2.5.4 小鼠精子頂體及頂體反應(yīng)的檢測(cè)
            2.5.5 小鼠精子體外受精實(shí)驗(yàn)
            2.5.6 小鼠精子自然受精檢測(cè)
        2.6 表型相關(guān)分子機(jī)制研究
            2.6.1 精子受精相關(guān)分子mRNA水平的檢測(cè)
            2.6.2 精子受精相關(guān)分子ADAM3蛋白水平的檢測(cè)
            2.6.3 TRYX5 影響S13-16 期長(zhǎng)形精子中ADAM3 前體的穩(wěn)定性或正確定位
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀博士期間發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]絲氨酸蛋白酶與生殖[J]. 尚璇,沈春玲,王鑄鋼.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2016(09)
[2]體外誘導(dǎo)人精子頂體反應(yīng)方法的比較[J]. 曹翔,劉悅,陳國(guó)武,丁之德.  中國(guó)男科學(xué)雜志. 2010(07)



本文編號(hào)：3719759