環(huán)核苷酸磷酸二酯酶PDE9A作為研究具有調(diào)節(jié)血糖等功效的天然活性物質(zhì)的新型靶點,日益受到關(guān)注。通過異丙基硫代半乳糖苷誘導(dǎo)大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞表達獲得PDE9A,并通過Ni-NAT瓊脂糖樹脂親和柱、Q-Sepharose離子交換純化系統(tǒng)和Sephacryl S300分子篩純化系統(tǒng)進行逐級純化,最終獲得高純度的PDE9A蛋白,并應(yīng)用高效液相色譜進行酶活特性檢測,證明制備得到的蛋白質(zhì)具有較高的水解cGMP能力,能夠為新型降血糖功能性食品的開發(fā)提供依據(jù)。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 菌體與質(zhì)粒
        1.1.2 實驗試劑
    1.2 儀器與設(shè)備
        1.2.1 實驗儀器
        1.2.2 蛋白純化柱
    1.3 實驗方法
        1.3.1 重組pET15b-PDE9A質(zhì)粒誘導(dǎo)表達
        1.3.2 PDE9A蛋白純化
            1.3.2. 1 菌體破碎
            1.3.2. 2 基于重組蛋白多重性質(zhì)的分離純化
        1.3.3 PDE9A酶活力測定
        1.3.4 最適反應(yīng)溫度的測定
        1.3.5 最適pH值的測定
        1.3.6 Mg2+離子和DTT對酶活力的影響
    1.4 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 pET15b-PDE9A質(zhì)粒誘導(dǎo)表達分析
    2.2 PDE9A蛋白的分離純化分析
    2.3 PDE9A蛋白酶活性分析
    2.4 PDE9A蛋白最適反應(yīng)溫度分析
    2.5 PDE9A蛋白最適反應(yīng)pH值分析
    2.6 Mg2+和DTT對酶活力的影響分析
3 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
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