木薯（Manihot esculenta Crantz,cassava）是世界七大作物之一,也是熱帶地區(qū)主要的糧食作物,然而干旱、鹽堿、低溫等環(huán)境因素導(dǎo)致木薯產(chǎn)量嚴(yán)重降低。前期研究表明選擇性剪接參與許多生理反應(yīng)過程,是響應(yīng)非生物脅迫的一種重要轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制。富含絲氨酸和精氨酸的SR蛋白（serine/arginine-rich proteins,SR）是一類重要的剪接因子,其在植物響應(yīng)非生物脅迫過程中具有重要作用。生物信息分析表明Me SCL30是木薯SR蛋白家族成員之一,因此本論文旨在解析Me SCL30蛋白的重要功能,獲得的主要研究結(jié)果如下:1、克隆木薯Me SCL30蛋白編碼區(qū)片段,并通過Gateway體系構(gòu)建植物表達(dá)載體。通過農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化到擬南芥中,篩選得到純合株系進(jìn)行后續(xù)表型分析。2、生物信息學(xué)分析表明:Me SCL30基因全長為816bp,編碼271個氨基酸,富含53個帶正電荷的Arg殘基,蛋白大小約為31k D,等電點p I為11.16,含有7個外顯子和6個內(nèi)含子,是親水的堿性蛋白。Me SCL30蛋白包含RRM結(jié)構(gòu)域和RS結(jié)構(gòu)域,與擬南芥At SCL30的親緣關(guān)系最近... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 木薯介紹
    1.2 植物對干旱脅迫的響應(yīng)機(jī)制
        1.2.1 干旱脅迫下植物水分生理的變化
        1.2.2 干旱脅迫下植物脫落酸(ABA)的生物合成變化
        1.2.3 植物分子水平的干旱脅迫響應(yīng)
    1.3 選擇性剪接
        1.3.1 選擇性剪接介紹
        1.3.2 選擇性剪接過程
        1.3.3 選擇性剪接與疾病
    1.4 SR蛋白研究進(jìn)展
        1.4.1 SR蛋白的介紹與分類
        1.4.2 SR蛋白的功能調(diào)控
    1.5 研究的目的與意義
    1.6 技術(shù)路線
2 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及載體
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 木薯苗的擴(kuò)繁
        2.2.2 木薯RNA提取
        2.2.3 RNA反轉(zhuǎn)錄成c DNA
        2.2.4 半定量PCR
        2.2.5 實時熒光定量PCR
        2.2.6 基因克隆及載體構(gòu)建
        2.2.7 亞細(xì)胞定位
        2.2.8 擬南芥轉(zhuǎn)化
        2.2.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥純合株系的篩選與鑒定
        2.2.10 轉(zhuǎn)基因擬南芥表型分析
        2.2.11 酶活測定
        2.2.12 生理指標(biāo)測定
3 結(jié)果與分析
    3.1 生物信息學(xué)分析
    3.2 氨基酸序列比對及進(jìn)化樹分析
        3.2.1 MeSCL30氨基酸序列比對
        3.2.2 MeSCL30進(jìn)化樹分析
    3.3 啟動子順式作用元件分析
    3.4 不同脅迫處理后MeSCL30基因的剪接變化
    3.5 不同脅迫處理后MeSCL30在木薯葉片中的表達(dá)
    3.6 MeSCL30的克隆與載體構(gòu)建
    3.7 MeSCL30蛋白的亞細(xì)胞定位
    3.8 MeSCL30在木薯不同組織部位的表達(dá)
    3.9 過表達(dá)MeSCL30擬南芥陽性株系篩選
    3.10 MeSCL30轉(zhuǎn)基因擬南芥高表達(dá)株系篩選
    3.11 過表達(dá)MeSCL30擬南芥在培養(yǎng)皿上的表型
        3.11.1 Sorbitol處理后生長表型分析
        3.11.2 Sorbitol萌發(fā)表型分析
        3.11.3 ABA處理后生長表型分析
        3.11.4 ABA處理后萌發(fā)表型分析
    3.12 過表達(dá)MeSCL30擬南芥在土中的表型
    3.13 理化特性分析
    3.14 干旱脅迫相關(guān)基因的表達(dá)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間參與的科研簡介
附錄
縮略詞表
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]干旱脅迫對木薯SC5抗性生理指標(biāo)的影響[J]. 王樹昌,于曉玲,阮孟斌,李淑霞,彭明.  分子植物育種. 2018(04)
[3]血清前列腺特異性抗原同源異構(gòu)體2在前列腺癌診斷中的應(yīng)用價值[J]. 閆存玲,李志艷,何群,歐海利,史曉敏,李海霞,焦莉莉,李峻,蘇晉偉,馮珍如.  中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志. 2015 (12)
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[10]兩個大豆GmSBP基因的特征、亞細(xì)胞定位及對非生物脅迫的響應(yīng)[J]. 楊艷,王爽,黃麗燕,馬洪雨,舒英杰,何小玲,麻浩.  生物工程學(xué)報. 2014(11)

碩士論文
[1]木薯SR蛋白家族的系統(tǒng)命名及表達(dá)分析[D]. 馬思雅.海南大學(xué) 2018



本文編號：3673541