通過順式作用元件類型的選擇和元件間的位置關系的排列組合有望篩選出理想的人工啟動子。以本底低、誘導活性相對較高的WGFS為基礎,在其序列的上游、中游和下游分別插入V元件二聚體,設計出VWGFS、WGVFS、WGFSV 3個改良啟動子。用改良啟動子替換質粒pBI121中調控gus基因表達的CaMV35S啟動子,得到重組質粒后導入農桿菌GV3101。用農桿菌滲入法轉化尾葉桉、廣林9號桉和廣州1號桉的葉盤,48 h后用GUS染色法檢測啟動子本底活性。染色結果顯示:與原WGFS啟動子相比,插入V元件明顯改變了啟動子的本底表達活性;當V元件插入在原啟動子下游時得到的WGFSV啟動子本底活性顯著升高。以尾葉桉葉盤為材料,用農桿菌侵染后共培養(yǎng)24 h,再用水楊酸、青枯菌或疫霉菌孢子誘導處理24 h,提取總RNA、反轉錄得cDNA,通過實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）檢測改良啟動子的誘導轉錄活性。設原WGFS啟動子的本底轉錄活性為1,qRT-PCR結果顯示:當V元件插入在中游時得到的WGVFS啟動子本底活性最低,為1.17;當V元件插入在下游時得... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 改良啟動子設計與載體構建
    1.3 農桿菌侵染處理及GUS染色
    1.4 誘導處理及qRT-PCR檢測
2 結果與分析
    2.1 GUS染色結果及分析
    2.2 改良啟動子轉錄特性的qRT-PCR檢測
3 結論與討論


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]尾葉桉葉組織中8個人工啟動子轉錄特性[J]. 黃真池,李柳如,鐘子倩,沈金玲,李恒.  東北林業(yè)大學學報. 2019(04)
[3]擬南芥中人工啟動子GWSF轉錄特性及乙烯誘導活性分析[J]. 黃真池,李恒.  植物生理學報. 2018(01)
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本文編號：3672705