細(xì)菌進(jìn)化出了一系列精細(xì)又復(fù)雜的大分子納米裝置來(lái)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)多種多樣的底物大分子,包括蛋白質(zhì)、小分子、DNA和毒力因子等,使其在復(fù)雜多變及惡劣的環(huán)境中生存、繁殖并建立感染。近些年,革蘭氏陰性菌I型-Ⅵ型分泌系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和分子機(jī)制取得了巨大的進(jìn)展,這些研究極大的加強(qiáng)了我們對(duì)各種分泌系統(tǒng)分子機(jī)制和功能多樣性的理解。六型分泌系統(tǒng)（Type Ⅵ secretion system,T6SS）是近些年發(fā)現(xiàn)的可以自由伸縮并靶向分泌效應(yīng)分子的大分子結(jié)構(gòu)裝置,功能的多樣性表現(xiàn)在參與細(xì)菌間競(jìng)爭(zhēng)、群體密度感應(yīng)、細(xì)胞毒性、宿主體內(nèi)定殖、細(xì)菌的毒力和存活等生物學(xué)活動(dòng)。目前,對(duì)T6SS的功能和結(jié)構(gòu)的研究有了長(zhǎng)足的累積,但是調(diào)控T6SS的機(jī)制研究較少。本實(shí)驗(yàn)室臨床分離株,腸外致病性大腸桿菌（Porcine Extraintestinal pathogenic Escherichia coli,Ex PEC）PCN033前期研究表明,PCN033有一套完整的功能性的T6SS,在細(xì)菌間競(jìng)爭(zhēng)、細(xì)菌與宿主的互作和致病等方面發(fā)揮著重要的作用。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.點(diǎn)突變菌株Rcs FS2DM3Q的構(gòu)建及轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析首先用多粘類芽孢... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表(Abbreviation)
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 Ⅵ分泌系統(tǒng)
        1.1.1 Ⅵ分泌系統(tǒng)
        1.1.2 Ⅵ分泌系統(tǒng)研究進(jìn)展
    1.2 Ⅵ分泌系統(tǒng)的調(diào)控
    1.3 Rcs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)
        1.3.1 信號(hào)感知和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.2 RcsF
        1.3.3 RcsB
        1.3.4 RcsC
        1.3.5 RcsD
        1.3.6 Rcs調(diào)控的靶標(biāo)
        1.3.7 Rcs調(diào)控子的功能
        1.3.8 Rcs調(diào)控子與環(huán)境適應(yīng)性
    1.4 BaeSR雙組份調(diào)控系統(tǒng)
    1.5 細(xì)菌的環(huán)境適應(yīng)性
    1.6 大腸桿菌T6SS研究現(xiàn)狀
        1.6.1 效應(yīng)因子和功能
        1.6.2 調(diào)控
    1.7 立題依據(jù)
第2章 研究的目的及意義
第3章 材料與方法
    3.1 前言
    3.2 材料
        3.2.1 試劑及試劑盒
        3.2.2 菌株、質(zhì)粒、細(xì)胞、試驗(yàn)動(dòng)物和引物
        3.2.3 儀器
        3.2.4 主要溶液的配制
    3.3 方法
        3.3.1 基因缺失突變株的構(gòu)建
        3.3.2 蛋白的原核表達(dá)和純化
        3.3.3 PCR和酶切反應(yīng)體系
        3.3.4 熒光定量PCR
        3.3.5 Western印跡
        3.3.6 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        3.3.7 吞噬存活試驗(yàn)
        3.3.8 粘附侵入試驗(yàn)
        3.3.9 凝膠阻滯試驗(yàn)
        3.3.10 表面等離子體質(zhì)膜共振試驗(yàn)
        3.3.11 足跡法
        3.3.12 細(xì)菌存活率
        3.3.13 活性氧檢測(cè)
        3.3.14 ICP-MS測(cè)定胞內(nèi)離子
        3.3.15 體內(nèi)定殖試驗(yàn)和病理組織變化
        3.3.16 Hcp蛋白多克隆抗體的制備
        3.3.17 血腦屏障通透性試驗(yàn)
        3.3.18 統(tǒng)計(jì)分析
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 Rcs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)控T6SS機(jī)制的研究
        4.1.1 多粘菌素B對(duì)強(qiáng)弱毒株生長(zhǎng)的影響
        4.1.2 點(diǎn)突變菌株Rcs FS2DM3Q的構(gòu)建及轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序分析
        4.1.3 突變株Rcs FS2DM3Q相關(guān)表型驗(yàn)證
        4.1.4 Rcs B正調(diào)控T6SS的表達(dá)
        4.1.5 Rcs B調(diào)控T6SS以應(yīng)對(duì)氧化壓力脅迫
        4.1.6 T6SS和 rcs B缺失降低Ex PEC對(duì)小鼠的致病性
        4.1.7 基因回復(fù)突變株的表型驗(yàn)證
    4.2 Bae SR調(diào)控T6SS通路的研究
        4.2.1 鋅離子壓力刺激對(duì)強(qiáng)弱毒株生長(zhǎng)的影響
        4.2.2 Bae R正調(diào)控T6SS的表達(dá)
        4.2.3 Bae R激活T6SS以應(yīng)對(duì)離子壓力刺激
第5章 討論
    5.1 Rcs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)調(diào)控Ex PEC的 T6SS
    5.2 T6SS對(duì)氧化壓力應(yīng)激的反擊
    5.3 T6SS在病原菌感染致病中發(fā)揮的作用
    5.4 雙組份信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)Bae SR調(diào)控Ex PEC的 T6SS
    5.5 病原菌的環(huán)境適應(yīng)性
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3670960