利用生物化學(xué)與生物物理學(xué)前沿技術(shù)系統(tǒng)地分析了鴿子（Columba livia）DHX36解旋酶的酶學(xué)特性。通過原核表達純化系統(tǒng)獲得了純度大于95%的ClDHX36蛋白。利用熒光各向異性法研究ClDHX36的底物結(jié)合偏好性,結(jié)果表明ClDHX36偏好結(jié)合ssRNA、ssDNA和G4,并且優(yōu)先結(jié)合序列中富含鳥嘌呤的ssDNA。通過快速停留光譜技術(shù)探索ClDHX36的解旋活性,明確了ClDHX36解旋方向性為3′-5′,更傾向于解旋尾鏈為Grich和G4的dsDNA底物,且ClDHX36的解旋活性與底物的尾鏈長度呈負相關(guān)性。本研究揭示了ClDHX36在結(jié)合和解旋底物過程中均具有明顯的底物偏好性,為深入研究DHX36的工作機理提供參考。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 底物制備
    1.3 ClDHX36表達載體的構(gòu)建
    1.4 ClDHX36蛋白的誘導(dǎo)表達與純化
    1.5 ClDHX36的底物結(jié)合偏好性測定
    1.6 ClDHX36的底物解旋偏好性測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 ClDHX36載體構(gòu)建和蛋白表達純化
    2.2 ClDHX36對底物結(jié)構(gòu)的結(jié)合偏好性分析
    2.3 ClDHX36對底物序列的結(jié)合偏好性分析
    2.4 ClDHX36的解旋方向性及解旋偏好性分析
3 討論



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