發(fā)布時間：2022-07-04 21:39

　　采用易錯PCR方法,對β-甘露聚糖酶進行體外分子定向進化,通過調(diào)整dNTP比例和加入不同濃度的Mn2+,向β-甘露聚糖酶中隨機引入突變,構(gòu)建突變文庫,并對篩選得到的突變菌株的突變酶酶學性質(zhì)進行研究.結(jié)果表明:在突變文庫的構(gòu)建過程中,當Mn2+濃度為0.01 mmol/L時,陽性轉(zhuǎn)化率最高,達到80%,氨基酸的突變個數(shù)為2.0個,符合易錯PCR突變文庫的構(gòu)建原則;經(jīng)過兩輪易錯PCR構(gòu)建的突變文庫庫容量約為4000,從中篩選出的突變畢赤酵母菌X-33/p GAPZαA-GwMan26A-27的突變酶GwMan26A-27具有耐酸、耐高溫且酶活力較高的特性;與突變前相比,GwMan26A-27具有較寬的酶促反應溫度范圍和適宜pH值范圍,熱穩(wěn)定性和p H穩(wěn)定性均有較大提升;在胃蛋白酶液和胰蛋白酶液中水浴2 h,GwMan26A-27的消化酶穩(wěn)定性較突變前也均有所提升. 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 菌株和質(zhì)粒
    1.2 主要試劑
    1.3 培養(yǎng)基
    1.4 儀器與設備
    1.5 實驗方法
        1.5.1 易錯PCR引物的設計方法
        1.5.2 易錯PCR擴增方法
        1.5.3 易錯PCR突變文庫的構(gòu)建方法
        1.5.4 重組子的鑒定方法
        1.5.5 易錯PCR突變文庫的篩選方法
            1.5.5. 1 突變酶的初篩
            1.5.5. 2 突變酶的復篩
        1.5.6 突變酶酶學性質(zhì)的研究方法
            1.5.6. 1 溫度和pH值對突變酶酶活力的影響
            1.5.6. 2 突變酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性
            1.5.6. 3 消化酶對突變酶酶活力的影響
2 結(jié)果與分析
    2.1 易錯PCR突變文庫的構(gòu)建結(jié)果分析
        2.1.1 易錯PCR條件的確立
        2.1.2 易錯PCR突變文庫的建立
    2.2 易錯PCR突變文庫的篩選結(jié)果分析
    2.3 突變酶酶學性質(zhì)的研究結(jié)果分析
        2.3.1 溫度和pH值對突變酶酶活力的影響結(jié)果分析
        2.3.2 突變酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性結(jié)果分析
        2.3.3 消化酶對突變酶活力的影響結(jié)果分析
3 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]耐高溫β-甘露聚糖酶畢赤酵母菌M27-8發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 熊進,黃魁英,夏楓耿,陳舒潔,胡海艷.  中國飼料. 2017(19)



本文編號：3655973