Trigger Factor（TF）是大腸桿菌中具有核糖體結(jié)合位點(diǎn)的分子伴侶。作為新生肽鏈合成后遇到的第一個(gè)分子伴侶,TF執(zhí)行著協(xié)助蛋白質(zhì)正確折疊這一重要功能,在原核生物分子伴侶網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)極其重要的地位。TF具有foldase、unfoldase和holdase三種分子伴侶活性,各種活性之間以不同程度作用于新生肽鏈,幫助后者進(jìn)行折疊。本課題將通過構(gòu)建具有不同分子伴侶活性的,能夠與核糖體結(jié)合的分子伴侶,并檢測其性質(zhì),從而探究三種分子伴侶活性各自對(duì)肽鏈折疊所產(chǎn)生的影響。本課題選取Dna K、Clp B、Dna J和Skp四種具有不同活性的分子伴侶作為改造對(duì)象,將TF的N結(jié)構(gòu)域連接到這四種分子伴侶中,構(gòu)建出具有核糖體結(jié)合位點(diǎn)的不同分子伴侶活性的融合蛋白NTF-Dna K、NTF-Clp B、NTF-Dna J和NTF-Skp,并通過蛋白誘導(dǎo)表達(dá)和純化,得到了目的蛋白。之后,本研究對(duì)融合蛋白進(jìn)行了分子伴侶活性和結(jié)構(gòu)性質(zhì)檢測,結(jié)果表明TF的N結(jié)構(gòu)域的存在不會(huì)對(duì)所制備的融合蛋白的活性產(chǎn)生影響。與此同時(shí),本研究還對(duì)TF及其他分子伴侶的單基因敲除菌株的轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組、表型數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)具有多種... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)黑龍江省211工程院校985工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 分子伴侶與蛋白質(zhì)折疊
    1.2 核糖體結(jié)合分子伴侶
    1.3 Trigger Factor的結(jié)構(gòu)組成及功能
    1.4 不同分子伴侶間的相互作用
    1.5 課題研究內(nèi)容及研究意義
    1.6 本文技術(shù)路線
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 原核表達(dá)系統(tǒng)
        2.1.2 主要試劑及溶液的制備
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 目的質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        2.2.3 蛋白活性測定
第3章 不同特性的分子伴侶的制備和表征
    3.1 目的蛋白的制備
        3.1.1 目的蛋白的選擇
        3.1.2 構(gòu)建不同特性的分子伴侶質(zhì)粒
        3.1.3 蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化
    3.2 目的蛋白的光譜表征
    3.3 目的蛋白的活性檢測
        3.3.1 N_(TF)-DnaK及 DnaK的活性檢測
        3.3.2 N_(TF)-ClpB及 ClpB的活性檢測
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 TF不同特性的分子伴侶生理功能分析
    4.1 TF敲除對(duì)基因表達(dá)的影響
        4.1.1 TF敲除對(duì)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響
        4.1.2 TF敲除對(duì)基因蛋白水平表達(dá)的影響
        4.1.3 Δtig菌株在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平表達(dá)的比較
    4.2 DnaK敲除對(duì)基因表達(dá)的影響
        4.2.1 DnaK敲除對(duì)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的影響
        4.2.2 DnaK敲除對(duì)基因蛋白水平表達(dá)的影響
        4.2.3 Δtig菌株和Δdna K菌株轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)的比較
        4.2.4 Δtig菌株和Δdna K菌株蛋白水平表達(dá)的比較
    4.3 ClpB蛋白組學(xué)分析
        4.3.1 ClpB底物類型分析
        4.3.2 TF與 ClpB組學(xué)數(shù)據(jù)差異分析
    4.4 Skp蛋白組學(xué)分析
        4.4.1 Skp底物類型分析
        4.4.2 TF與Skp組學(xué)數(shù)據(jù)差異分析
    4.5 單基因敲除菌株的表型變化
    4.6 討論
    4.7 本章小結(jié)
結(jié)論
展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3635066