隨著對長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA,LncRNA）研究的深入,家蠶長鏈非編碼RNA的功能研究將為家蠶的遺傳、進(jìn)化和基因組研究奠定基礎(chǔ)。長鏈非編碼RNA的神經(jīng)豐度和特異性對神經(jīng)發(fā)育、認(rèn)知活動和神經(jīng)退行性過程有重要影響。由于細(xì)胞自噬（Autophagy）的分子機(jī)制在不同物種中具有一定保守性,自噬通路參與到多種疾病的發(fā)生與發(fā)展,且長鏈非編碼RNA存在著時空特異性的表達(dá)模式。通過研究長鏈非編碼RNA對家蠶自噬信號通路的調(diào)控機(jī)制,將為長鏈非編碼RNA作為藥物靶標(biāo)在疾病的診斷和治療中的功能研究具有重要價值和借鑒意義。本研究以家蠶為研究對象,通過對家蠶個體注射20-羥基蛻皮酮（20-hydroxyecdysone,20E）,又稱為蛻皮激素,檢測家蠶組織細(xì)胞的自噬變化,然后通過高通量測序技術(shù)以及實(shí)時熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR Detecting System,QPCR）技術(shù),篩選出對家蠶自噬相關(guān)的LncRNAs,并對其進(jìn)行序列鑒定,為進(jìn)一步研究LncRNAs調(diào)控家蠶自噬信號通路的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ),同時也為LncRNAs在疾病和腫瘤的... 

【文章來源】：南陽師范學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

家蠶各個時期發(fā)育狀態(tài)簡易圖

圖 3-1 脂肪體處理不同時間溶酶體染色（40x）Figure 3-1 The lysosomal staining of fat body at different time (40x)CK 為溶劑對照處理的對照組，20E 為蛻皮激素處理的實(shí)驗(yàn)組。e: CK is the control group treated with solvent, and 20E is the experimental group treated hormone.據(jù)圖片可以看出，在蛻皮激素處理 2 h、6 h、12 h 后，對照組之間紅色熒不大；與對照組相比實(shí)驗(yàn)組中的紅色熒光亮點(diǎn)明顯增多，即溶酶體的數(shù)量增理時間的增加，自噬發(fā)生越明顯。該結(jié)果與 Tian 等[58]的研究結(jié)果基本一明蛻皮激素成功誘導(dǎo)了家蠶脂肪體組織的自噬發(fā)生，且自噬發(fā)生比較明顯處理前后 2 h 和 6 h 各三個重復(fù)樣品送公司進(jìn)行長鏈非編碼 RNA 高通量測相關(guān)長鏈非編碼 RNA 的篩選和驗(yàn)證序結(jié)果顯示，蛻皮激素處理 2 h 前后具有顯著差異表達(dá)的長鏈非編碼 RN處理 6 h 前后差異表達(dá)的長鏈非編碼 RNA 有 64 個，2 h 和 6 h 都存在顯

與家蠶自噬相關(guān)的長鏈非編碼 RNA 的篩選和功能初探-Lnc560 載體進(jìn)行測序試驗(yàn)c560 擴(kuò)增產(chǎn)物序列是否正確，我們將 Lnc560 基證。nc560 目的基因片段cDNA 為模板對 Lnc560 基因進(jìn)行目的片段的 PC PCR 擴(kuò)增，95℃，5 min；95℃ 30 s，55℃ 300 min。取 5 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物用 1%的瓊脂糖凝膠電泳目的產(chǎn)物的單一，亮度高，分子量大小與 100 bp為 Lnc560 的擴(kuò)增產(chǎn)物。

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本文編號：3616525