TMEM16A（Transmembrane Protein 16A）是一種鈣離子(Ca²⁺)激活的氯離子通道（Calcium-activated Chloride Channels,CaCCs）,在機(jī)體內(nèi)廣泛表達(dá),具有重要的生理功能.迄今為止,TMEM16A在骨骼肌發(fā)育中的作用及機(jī)制尚無(wú)報(bào)道.本研究利用TMEM16A特異性抑制劑T16A_inh-A01首次探討了其表達(dá)下調(diào)對(duì)骨骼肌細(xì)胞分化的影響.研究發(fā)現(xiàn),T16A_inh-A01處理顯著抑制C2C12和原代成肌細(xì)胞的肌分化.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),T16A_inh-A01明顯抑制肌分化過(guò)程中生肌素Myogenin的表達(dá).研究結(jié)果提示,TMEM16A的鈣激活氯通道活性可能參與了骨骼肌細(xì)胞的分化過(guò)程,具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究. 

【文章來(lái)源】：南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,43(03)北大核心CSCD

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C2C12和原代成肌細(xì)胞分化過(guò)程中TMEM16A的表達(dá)

T16Ainh-A01(2-[(5-Ethyl-1,6-dihydro-4-methyl-6-oxo-2-pyrimidinyl)thio]-N-[4-(4-methoxyphenyl)-2-thiazolyl]-acetamide,中文名氨基苯基噻唑)是一種TMEM16A的特異性抑制劑(圖2A),可以抑制鈣離子激活的氯通道活性[17]. 在誘導(dǎo)肌分化時(shí),分化培養(yǎng)基中加入T16Ainh-A01,觀察肌管的形成,并利用MF20染色肌球蛋白重鏈顯示分化第4 d的肌管. 結(jié)果發(fā)現(xiàn),與DMSO對(duì)照相比,在濃度為10 μmol/L、20 μmol/L和50 μmol/L時(shí),T16Ainh-A01對(duì)于C2C12和原代成肌細(xì)胞的肌分化都有抑制作用,表現(xiàn)為肌管的形態(tài)變小和變短(圖2B、2D),肌分化指數(shù)降低(圖2C、2E),其中濃度為 20 μmol/L和 50 μmol/L時(shí)抑制作用最為顯著. 以上結(jié)果提示,C2C12及原代成肌細(xì)胞的肌分化過(guò)程需要鈣離子激活的氯通道活性.2.3 TMEM16A表達(dá)下調(diào)抑制原代成肌細(xì)胞肌管的形成

肌分化主要受MRF(Myogenic Regulatory Factors)家族成員的調(diào)節(jié)[18],生肌素Myogenin(MyoG)屬于MRF家族成員,是肌肉特異性堿性螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)轉(zhuǎn)錄因子,參與骨骼肌發(fā)育或肌細(xì)胞生成和修復(fù)的協(xié)調(diào),調(diào)節(jié)終末肌分化過(guò)程[19]. 在前面2.2中用不同濃度的T16Ainh-A01處理C2C12和原代成肌細(xì)胞時(shí),20 μmol/L以及50 μmol/L濃度的抑制劑對(duì)分化的影響顯著,因此選取20 μmol/L進(jìn)行下面的研究. 在分化培養(yǎng)基中加入20 μmol/L的T16Ainh-A01,在DM1(分化第1 d)和DM3(分化第3 d)時(shí)提取蛋白進(jìn)行 Western blot 分析. 結(jié)果發(fā)現(xiàn),MyoG蛋白表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組(圖4).圖4 T16Ainh-A01抑制C2C12和原代成肌細(xì)胞分化中MyoG表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠原代成肌細(xì)胞分離、純化及培養(yǎng)[J]. 熊雷,何衍佶,戴威,趙圓,高彥飛,鄧忠良,聶茂.  現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生. 2017(03)



本文編號(hào)：3616368