細(xì)胞衰老是由多種應(yīng)激反應(yīng)綜合導(dǎo)致的一個(gè)過(guò)程,這些應(yīng)激反應(yīng)將細(xì)胞引入到一種不可逆的生長(zhǎng)停滯的狀態(tài)。線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的平衡,是機(jī)體維持細(xì)胞正常運(yùn)轉(zhuǎn),應(yīng)對(duì)各種損傷刺激和緩解細(xì)胞死亡必不可少的重要保障。當(dāng)線粒體抗氧化防御系統(tǒng)、分裂融合、生物合成等發(fā)生異常時(shí),會(huì)造成嚴(yán)重的線粒體功能障礙,導(dǎo)致細(xì)胞不可逆的生長(zhǎng)停滯,導(dǎo)致神經(jīng)退行性病、癌癥、心血管類疾病、糖尿病等衰老相關(guān)性疾病。Omi/HtrA2是一種絲氨酸蛋白酶,屬于HtrA家族,正常情況下位于線粒體膜間隙中,在維持線粒體內(nèi)穩(wěn)態(tài)中起到重要作用。Omi/HtrA2是具有N末端線粒體靶向序列的核編碼蛋白。Omi/HtrA2含有一個(gè)或兩個(gè)C末端PDZ結(jié)構(gòu)域,可激活其絲氨酸蛋白酶活性。Omi/HtrA2敲除鼠又名HtrA2^mnd2小鼠（-/-）,其中Omi/HtrA2的S276C發(fā)生錯(cuò)義突變,導(dǎo)致Omi/HtrA2蛋白酶活性的喪失。小鼠表現(xiàn)出肌肉萎縮,神經(jīng)變性。為了驗(yàn)證各組織的線粒體功能、氧化應(yīng)激等的變化差異,本實(shí)驗(yàn)利用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)了HtrA2^mnd2小鼠（-/-）的腦、心臟、肝臟、腎臟4個(gè)組織線粒體功能相關(guān)基... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

P62基因表達(dá)序列模式圖

第三章 結(jié) 果3.1 HtrA2mnd2小鼠形態(tài)學(xué)變化HtrA2mnd2小鼠（-/-）由 Omi/HtrA2 基因雜合子小鼠（+/-）交配繁殖而得，新生幼崽在 3 周左右進(jìn)行基因型鑒定。根據(jù)酶切片段長(zhǎng)度及數(shù)量，鑒定小鼠為野生型小鼠（+/+）（Wildtype）、Omi/HtrA2 基因雜合子小鼠（+/-）（Heterozygote）和 HtrA2mnd2小鼠（-/-）（Homozygote）。（圖 3.1）取 45 天齡的野生型小鼠（+/+）一同處死，留取腦、心臟、肝臟和腎臟組織，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)鑒定結(jié)果分離出 HtrA2mnd2小鼠（-/-）和野生型小鼠（+/+）分籠飼養(yǎng)。25天左右，HtrA2mnd2小鼠（-/-）逐漸表現(xiàn)出肌肉萎縮、彎腰駝背、共濟(jì)失調(diào)和靜止性震顫，步態(tài)不穩(wěn)等形態(tài)特征。HtrA2mnd2小鼠（-/-）生存期約為 45 天（圖 3.2）。

左右進(jìn)行基因型鑒定。根據(jù)酶切片段長(zhǎng)度及數(shù)量）（Wildtype）、Omi/HtrA2 基因雜合子小鼠（+/-）鼠（-/-）（Homozygote）。（圖 3.1）取 45 天齡的野腦、心臟、肝臟和腎臟組織，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。果分離出 HtrA2mnd2小鼠（-/-）和野生型小鼠（+/nd2小鼠（-/-）逐漸表現(xiàn)出肌肉萎縮、彎腰駝背、共等形態(tài)特征。HtrA2mnd2小鼠（-/-）生存期約為 45圖 3.1 瓊脂糖凝膠電泳顯像結(jié)果為野生型小鼠，（+/-）為雜合子小鼠，（-/-）HtrA


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