反硝化作用是將硝酸鹽和亞硝酸鹽還原為氣態(tài)氮化物和氮氣的過程,對地球生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動具有不可或缺的作用。該過程包含硝酸鹽還原、亞硝酸鹽還原、一氧化氮還原和氧化亞氮還原4個步驟,分別由硝酸鹽還原酶、亞硝酸鹽還原酶、一氧化氮還原酶和氧化亞氮還原酶4種金屬酶催化完成,其中亞硝酸鹽向一氧化氮的轉(zhuǎn)化是速率控制步驟,因此檢測亞硝酸鹽還原酶編碼基因nirS可以從分子生物學(xué)角度深入分析微生物種群特性和氮元素的轉(zhuǎn)化規(guī)律,進而為評估生態(tài)環(huán)境健康狀況等科研與生產(chǎn)活動提供支撐數(shù)據(jù)。用于nirS基因檢測的常規(guī)方法,諸如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、變性梯度凝膠電泳和基因芯片等,都有很高的靈敏度和準(zhǔn)確度,但往往受限于專業(yè)實驗室、專業(yè)技術(shù)人員和貴重儀器設(shè)備的需求,而且費用較高,因而很大程度上阻礙了它們在環(huán)境樣品快速分析領(lǐng)域的應(yīng)用。環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴增（Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP）是一種新型的核酸檢測技術(shù)。體外擴增DNA時,LAMP過程無需升溫、降溫循環(huán)即可進行目標(biāo)DNA片段的擴增,而且采用4條或者6條引物同時識別6個位點,較之于PCR,具有更高的效率和... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

自然界氮循環(huán)簡圖

圖 2-1 nirS 序列在 LAMP 引物中的定位Fig. 2-1 Priming locations and orientation of the LAMP primers developed to amplify P.aeruginosa nirS. The arrows show sequence directions from 5’to 3’. The asterisks denoteconsistent nucleotides sequence not shown.表 2-3 LAMP 引物序列Tab. 2-3 LAMP primer sequences引物 序列 (5'-3')nirS-F3 GGCCGAAGAAACAGCTCAACnirS-B3 CGATCATGTCGATCCGCGnirS-FIP TGCTGTCGCCGTCGACCAGTTTTGACCTCGACCTGCCCAAnirS-BIP CGTCAAGGTCATCGATACCGGCTTTTTCACCAGCAGGTAGCGG2.3.2 LAMP 反應(yīng)體系和擴增產(chǎn)物表征以基因組 DNA 為模板的 LAMP 檢測參照我們之前的報道[101]進行（過程示意見圖 2-2（a））�？傮w積為 25 μL 的反應(yīng)混合液包括 1.6 μmol/L 的 FIP 和 BIP、

圖 2-2 檢測銅綠假單胞菌 nirS 基因示意圖thodological schematics for the DNA-template based LAMP assay (a)te based direct LAMP assay (b) for detecting the nirS genes of P. aeru反應(yīng)體系的優(yōu)化lbin 等人的方法，優(yōu)化 LAMP 反應(yīng)體系的溫度和反應(yīng)時間8.70 fg/μL -187.00ng/μL之間的Pseudmonas aeruginosa PA增模板。然后在 61℃、62℃、63℃、64℃和 65℃下分別進測定的最佳溫度后，再以不同的反應(yīng)時間進行 LAMP，50、60、70 和 80min。驗

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3611738