目的探究miR-449是否具有調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）成骨分化的作用。方法分離、培養(yǎng)骨髓MSCs,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD44、CD29、CD34、CD45等表面相關(guān)標(biāo)志抗原的表達(dá)鑒定骨髓MSCs;將MSCs分為對(duì)照組、miR-449a組、miR-449b組及anti-miR-449組,對(duì)照組用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng),其余各組分別經(jīng)miR-449a/b或inhibitors轉(zhuǎn)染后在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng),分別于培養(yǎng)第3、6、9、12天檢測(cè)各組堿性磷酸酶活性,qRT-PCR檢測(cè)miR-449a/b對(duì)成骨特異性基因Runx2、Osterix表達(dá)的影響。結(jié)果①第4代間充質(zhì)干細(xì)胞CD44、CD29表達(dá)陽(yáng)性,而CD34和CD45表達(dá)陰性,符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的特征。②成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3、6、9、12 d后,MSCs細(xì)胞堿性磷酸酶活性較上一時(shí)間點(diǎn)升高,且呈時(shí)間依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;MSCs成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3、6、9、12 d后,Runx2、Osterix表達(dá)水平逐漸升高。③miR-449a組和miR-449b組AKP活性低于對(duì)照組,而anti-miR-449組AKP活性升高,差異有... 

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【部分圖文】：

骨髓MSCs成骨誘導(dǎo)后成骨基因Runx2和Osterix表達(dá)

AKP活性檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，miR-449a組和miR-449b組AKP活性低于轉(zhuǎn)染對(duì)照細(xì)胞，而anti-miR-449組AKP活性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05);qRT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-449a/b和miR-449 inhibitors對(duì)成骨特異性基因Runx2、Osterix表達(dá)的影響顯示，與對(duì)照組相比，miR-449a組和miR-449b組Runx2、Osterix表達(dá)均下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)圖4。3 討論

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)骨髓MSCs細(xì)胞免疫標(biāo)記

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR?125b調(diào)控Runx2/Osx表達(dá)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨機(jī)制的影響[J]. 彭俊,劉英杰,宗陽(yáng),詹玉林.  東南國(guó)防醫(yī)藥. 2019(02)
[2]Decreased osteogenesis of adult mesenchymal stem cel s by reactive oxygen species under cyclic stretch: a possible mechanism of age related osteoporosis[J]. Jiali Tan,Xin Xu,Zhongchun Tong,Jiong lin,Qiujun Yu,Yao Lin,Wei Kuang.  Bone Research. 2015(01)



本文編號(hào)：3607414