新城疫（Newcastle Disease,ND）由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）感染引起的禽的高度接觸性傳染病。該病主要導致禽類呼吸困難、神經(jīng)紊亂、黏膜出血、排綠色稀便。其感染性強、死亡率高,給全球養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。由于ND的臨床癥狀易與禽流感、傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎等其它家禽呼吸系統(tǒng)疾病混淆,因此,高效簡易地能夠將ND與其它呼吸系統(tǒng)疾病鑒別診斷的技術研發(fā)迫在眉睫。目前,ELISA檢測方法已應用于NDV的檢測,該方法具有操作簡單、快速檢測、特異性高等優(yōu)點,但是由于商品化生產(chǎn)成本高、難以長期保存等缺點限制了其臨床上的廣泛應用。納米抗體（Nanobody）是駱駝科體內(nèi)特有的一種天然缺失輕鏈和重鏈第一恒定區(qū)的特殊Ig G。納米抗體可以通過基因工程技術進行修飾而不改變其與抗原的結合特性,易于在不同系統(tǒng)中表達,并能夠與多種標簽融合表達,從而為疾病診斷提供一種簡單、有效的檢測方法。近年來,從納米抗體衍生出的fenobody（鐵蛋白融合的納米抗體）和RANbody（納米抗體融合報告基因）,已用于疫病免疫診斷方法的建立。但是,關于使用fenobo... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

NDV結構示意圖(Belloetal.2018)

第一章文獻綜述7外，CDR1區(qū)的Cys殘基可以和CDR3形成使抗原結合位點穩(wěn)定的二硫鍵(Muyldermansetal.1994;Vuetal.1997)。VHH分子尺寸小于15kDa，尺寸在納米范圍內(nèi)（直徑約2.5nm，高度約4nm），也被稱為納米抗體（Nb，nanobody）(Sheriffetal.1996)。體積小，可迅速穿透炎癥，并易通過分子基因編輯技術對其進行修飾(Zhangetal.2004)。此外，由于在FR2中有親水氨基酸殘，能夠使VHHs的溶解度顯著增加。體積孝可變性、穩(wěn)定性、親和性和溶解性等優(yōu)點使VHHs成為免疫治療的理想工具。圖1-2納米抗體結構圖[引自(Iezzietal.2018)]Figure1-2Nanobodystructure[quotedfrom(Iezzietal.2018)]1.2.2納米抗體的應用1.2.2.1納米抗體在科學研究中的應用作為親和捕獲試劑，VHH被應用于蛋白質構象、生物分子相互作用、重組蛋白純化和細菌檢測等方面的研究(Lietal.2018)。VHH可作為靶向藥物載體，提高藥物治療效果。VHH脂質體與表皮生長因子受體（EGFR）結合，下調(diào)表皮因子受體的表達，從而抑制腫瘤的生長(Salemaetal.2016)。VHH作為靶向效應域，VHH與融合蛋白結合形成特定的治療區(qū)域(如酶或毒素)，進入靶細胞，增強治療效果。非洲錐蟲具有卵裂活性。抗布錐蟲的VHHs與人類截尾錐蟲融合用于治療非洲人類錐形蟲(Lietal.2018)。1.2.2.2納米抗體在疾病診斷的應用HER2（人表皮生長因子受體-2）是一種與乳腺癌相關的腫瘤標志物。Vancycken等人(D"Huyvetteretal.2014)篩選了38個標記為HER2受體的VHHs，通過對HER2靶向的Ga-NbPET的顯像，對健康及乳腺癌患者進行安全性評價。VHHs已被成功用于家畜布魯氏菌和耶爾森氏菌感染的區(qū)分，而單克隆抗體卻未能成功區(qū)分(Even-Desrumeauxetal.2010)。類似地，用于檢測豬帶絳蟲病感染的種屬特異性VHHs補充了現(xiàn)有的種屬特異性單克

幸源炕?腘DV顆粒作為抗原篩選納米抗體的報道。本章主要內(nèi)容包括NDVLaSota滅活疫苗株對駱駝的免疫、抗NDV納米抗體噬菌體展示文庫的構建、純化的NDV顆粒篩選特異性納米抗體、測序鑒定，最終獲得13株NDV特異性納米抗體。2.1材料2.1.1質粒、菌株、毒株、疫苗與實驗動物pMECS噬菌體展示載體為實驗室種子庫保存，M13KO7輔助噬菌體購自NEB，E.coliTG1感受態(tài)購自Beyotime（江蘇碧云天），NDVLaSota滅活疫苗購自河南普萊克公司，成年雄性雙峰駝購自甘肅省民勤，SPF雞胚購于山東浩泰生物，NDVLaSota毒株為實驗室種子庫保存。圖2-1噬菌體展示載體（pMECS）圖譜和多克隆酶切位點(Vinckeetal.2012)Figure2-1MapofpMECSphagevectorandMCS(Vinckeetal.2012)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]鑒別新城疫強、弱毒一步RT-PCR方法的建立及應用[J]. 明文龍,尹仁福,謝光耀,薛聰,王珂,袁乾亮,丁壯.  中國獸醫(yī)學報. 2015(07)
[2]新城疫病毒純化方法的比較研究[J]. 余祖華,丁軻,朱巧艷.  河南農(nóng)業(yè)科學. 2010(09)
[3]新城疫及其檢測方法研究進展[J]. 劉懷然,孔憲剛.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2008(10)
[4]新城疫病毒的基因組與結構蛋白特征[J]. 程相朝.  河南科技大學學報(農(nóng)學版). 2004(01)
[5]用膠體金免疫電鏡技術檢測新城疫病毒[J]. 薛擁志,孫繼國,甘永華,王連榮.  河北農(nóng)業(yè)大學學報. 2003(S1)
[6]ND La Sota毒種在SPF雞胚中增殖規(guī)律初探[J]. 王寶玲.  中國獸藥雜志. 2002(07)

博士論文
[1]新城疫病毒HN蛋白納米抗體的篩選及功能研究[D]. 高小龍.西北農(nóng)林科技大學 2016

碩士論文
[1]陜西省雞新城疫流行情況的病原學檢測及其免疫效果分析[D]. 劉浩.西北農(nóng)林科技大學 2014
[2]新城疫病毒F基因在真核及原核表達系統(tǒng)中的表達[D]. 王青.西北農(nóng)林科技大學 2007



本文編號：3577507