新城疫（Newcastle Disease,ND）由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）感染引起的禽的高度接觸性傳染病。該病主要導(dǎo)致禽類呼吸困難、神經(jīng)紊亂、黏膜出血、排綠色稀便。其感染性強(qiáng)、死亡率高,給全球養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。由于ND的臨床癥狀易與禽流感、傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎等其它家禽呼吸系統(tǒng)疾病混淆,因此,高效簡(jiǎn)易地能夠?qū)D與其它呼吸系統(tǒng)疾病鑒別診斷的技術(shù)研發(fā)迫在眉睫。目前,ELISA檢測(cè)方法已應(yīng)用于NDV的檢測(cè),該方法具有操作簡(jiǎn)單、快速檢測(cè)、特異性高等優(yōu)點(diǎn),但是由于商品化生產(chǎn)成本高、難以長期保存等缺點(diǎn)限制了其臨床上的廣泛應(yīng)用。納米抗體（Nanobody）是駱駝科體內(nèi)特有的一種天然缺失輕鏈和重鏈第一恒定區(qū)的特殊Ig G。納米抗體可以通過基因工程技術(shù)進(jìn)行修飾而不改變其與抗原的結(jié)合特性,易于在不同系統(tǒng)中表達(dá),并能夠與多種標(biāo)簽融合表達(dá),從而為疾病診斷提供一種簡(jiǎn)單、有效的檢測(cè)方法。近年來,從納米抗體衍生出的fenobody（鐵蛋白融合的納米抗體）和RANbody（納米抗體融合報(bào)告基因）,已用于疫病免疫診斷方法的建立。但是,關(guān)于使用fenobo... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

NDV結(jié)構(gòu)示意圖(Belloetal.2018)

第一章文獻(xiàn)綜述7外，CDR1區(qū)的Cys殘基可以和CDR3形成使抗原結(jié)合位點(diǎn)穩(wěn)定的二硫鍵(Muyldermansetal.1994;Vuetal.1997)。VHH分子尺寸小于15kDa，尺寸在納米范圍內(nèi)（直徑約2.5nm，高度約4nm），也被稱為納米抗體（Nb，nanobody）(Sheriffetal.1996)。體積小，可迅速穿透炎癥，并易通過分子基因編輯技術(shù)對(duì)其進(jìn)行修飾(Zhangetal.2004)。此外，由于在FR2中有親水氨基酸殘，能夠使VHHs的溶解度顯著增加。體積孝可變性、穩(wěn)定性、親和性和溶解性等優(yōu)點(diǎn)使VHHs成為免疫治療的理想工具。圖1-2納米抗體結(jié)構(gòu)圖[引自(Iezzietal.2018)]Figure1-2Nanobodystructure[quotedfrom(Iezzietal.2018)]1.2.2納米抗體的應(yīng)用1.2.2.1納米抗體在科學(xué)研究中的應(yīng)用作為親和捕獲試劑，VHH被應(yīng)用于蛋白質(zhì)構(gòu)象、生物分子相互作用、重組蛋白純化和細(xì)菌檢測(cè)等方面的研究(Lietal.2018)。VHH可作為靶向藥物載體，提高藥物治療效果。VHH脂質(zhì)體與表皮生長因子受體（EGFR）結(jié)合，下調(diào)表皮因子受體的表達(dá)，從而抑制腫瘤的生長(Salemaetal.2016)。VHH作為靶向效應(yīng)域，VHH與融合蛋白結(jié)合形成特定的治療區(qū)域(如酶或毒素)，進(jìn)入靶細(xì)胞，增強(qiáng)治療效果。非洲錐蟲具有卵裂活性�？共煎F蟲的VHHs與人類截尾錐蟲融合用于治療非洲人類錐形蟲(Lietal.2018)。1.2.2.2納米抗體在疾病診斷的應(yīng)用HER2（人表皮生長因子受體-2）是一種與乳腺癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物。Vancycken等人(D"Huyvetteretal.2014)篩選了38個(gè)標(biāo)記為HER2受體的VHHs，通過對(duì)HER2靶向的Ga-NbPET的顯像，對(duì)健康及乳腺癌患者進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。VHHs已被成功用于家畜布魯氏菌和耶爾森氏菌感染的區(qū)分，而單克隆抗體卻未能成功區(qū)分(Even-Desrumeauxetal.2010)。類似地，用于檢測(cè)豬帶絳蟲病感染的種屬特異性VHHs補(bǔ)充了現(xiàn)有的種屬特異性單克

幸源炕?腘DV顆粒作為抗原篩選納米抗體的報(bào)道。本章主要內(nèi)容包括NDVLaSota滅活疫苗株對(duì)駱駝的免疫、抗NDV納米抗體噬菌體展示文庫的構(gòu)建、純化的NDV顆粒篩選特異性納米抗體、測(cè)序鑒定，最終獲得13株NDV特異性納米抗體。2.1材料2.1.1質(zhì)粒、菌株、毒株、疫苗與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物pMECS噬菌體展示載體為實(shí)驗(yàn)室種子庫保存，M13KO7輔助噬菌體購自NEB，E.coliTG1感受態(tài)購自Beyotime（江蘇碧云天），NDVLaSota滅活疫苗購自河南普萊克公司，成年雄性雙峰駝購自甘肅省民勤，SPF雞胚購于山東浩泰生物，NDVLaSota毒株為實(shí)驗(yàn)室種子庫保存。圖2-1噬菌體展示載體（pMECS）圖譜和多克隆酶切位點(diǎn)(Vinckeetal.2012)Figure2-1MapofpMECSphagevectorandMCS(Vinckeetal.2012)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鑒別新城疫強(qiáng)、弱毒一步RT-PCR方法的建立及應(yīng)用[J]. 明文龍,尹仁福,謝光耀,薛聰,王珂,袁乾亮,丁壯.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(07)
[2]新城疫病毒純化方法的比較研究[J]. 余祖華,丁軻,朱巧艷.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(09)
[3]新城疫及其檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J]. 劉懷然,孔憲剛.  畜牧獸醫(yī)科技信息. 2008(10)
[4]新城疫病毒的基因組與結(jié)構(gòu)蛋白特征[J]. 程相朝.  河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)學(xué)版). 2004(01)
[5]用膠體金免疫電鏡技術(shù)檢測(cè)新城疫病毒[J]. 薛擁志,孫繼國,甘永華,王連榮.  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2003(S1)
[6]ND La Sota毒種在SPF雞胚中增殖規(guī)律初探[J]. 王寶玲.  中國獸藥雜志. 2002(07)

博士論文
[1]新城疫病毒HN蛋白納米抗體的篩選及功能研究[D]. 高小龍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016

碩士論文
[1]陜西省雞新城疫流行情況的病原學(xué)檢測(cè)及其免疫效果分析[D]. 劉浩.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[2]新城疫病毒F基因在真核及原核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)[D]. 王青.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3577507