神經(jīng)突起生長（neurite outgrowth）是哺乳類動物在神經(jīng)發(fā)育、神經(jīng)再生、神經(jīng)回路以及突觸連接的建立等神經(jīng)活動中一種必不可少的生理過程。在神經(jīng)發(fā)育性疾病、神經(jīng)外傷性疾病以及神經(jīng)退行性疾病的治療研究中,聚焦在神經(jīng)突起生長具有十分重要的意義。因此,理解調(diào)節(jié)神經(jīng)突起生長的分子機(jī)制,將有利于尋找相關(guān)疾病的有效藥物及完善治療方案。全反式維甲酸（retinoic acid,RA）作為維生素A的代謝產(chǎn)物,是多種細(xì)胞生長與發(fā)育中重要的外源性補(bǔ)充營養(yǎng)因子。同時,全反式維甲酸（RA）也是廣泛用于誘導(dǎo)神經(jīng)突起生長的因子之一。在哺乳類動物的中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中,存在著大量表達(dá)的維甲酸受體。維甲酸受體γ（retinoic acid receptor gamma,RARG）是維甲酸受體的其中一類亞型,但是其在神經(jīng)元突起生長的過程中的具體作用尚未清楚。MicroRNA-124（miR-124）是哺乳類動物大腦中表達(dá)最為豐富的miRNA之一。在RA誘導(dǎo)神經(jīng)分化過程中,miR-124的表達(dá)量隨之升高。同時,一直以來miR-124被認(rèn)為是促進(jìn)神經(jīng)突起生長的影響因子之一。然而,我們?nèi)晕粗續(xù)iR-124與維甲酸信... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?ｍｉＲ－１２４通過直接靶向ＲＡＲＧ－３＇ＵＴＲ中進(jìn)化上保守的ｍｉＲ－１２４結(jié)合位點(diǎn)特異性抑制??ＲＡＲＧ表達(dá)

?結(jié)果???數(shù)據(jù)分析顯示，在Ｎ２ａ細(xì)胞神經(jīng)元分化過程中，ｍｉＲ－１２４表達(dá)水平呈現(xiàn)升高的趨??勢（圖２Ｃ）。為了在其他細(xì)胞類型的神經(jīng)元分化過程中檢測ＲＡＲＧ和ｍｉＲ－１２４??的表達(dá)情況，我們選擇了?Ｐ１９細(xì)胞作為另外一種神經(jīng)元分化的細(xì)胞模型［１７２￣４］。??用ＲＡ誘導(dǎo)懸浮培養(yǎng)的Ｐ１９細(xì)胞四天后，去除ＲＡ的同時將細(xì)胞貼壁培養(yǎng)，使其??在神經(jīng)元分化培養(yǎng)基中繼續(xù)分化六天。期間，每兩天收集一次細(xì)胞樣品提取總??蛋白及總ＲＮＡ，使用免疫印跡技術(shù)或ＲＴ－ｑＰＣＲ技術(shù)進(jìn)行檢測分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如??圖所示，ＲＡＲＧ的表達(dá)在Ｐ］９細(xì)胞加入ＲＡ兩天的時候表現(xiàn)出下降的趨勢，在隨??后的八天內(nèi)一直維持較低的水平（圖２Ｄ和Ｅ）。相反，實(shí)時熒光定量ＰＣＲ數(shù)據(jù)??統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，在Ｐ１９細(xì)胞神經(jīng)元分化過程中，ｍｉＲ－１２４表達(dá)水平呈現(xiàn)升高??的趨勢（圖２Ｆ）??Ａ?Ｏｈ?８ｈ?１ｄ?２ｄ?３ｄ?４ｄ?５ｄ?Ｄ?ＲＡ?ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ??ｍｅｄｉｕｍ?ｍｅｄｉｕｍ??ＲＡＲＧ?爾細(xì)？?＿?績一?０?２?４?６?８?１０?ｄ??ＲＡＲＧ?？Ｍ??ＧＡＰＤＨ?，一??ＧＡＰＤＨ?ｍｕｍ??Ｂ?Ｅ??１．５－ｉ?１．５－１??＂５５?Ｔ?ｗ??￡?ｉ?〇＊ｎ?運(yùn)?ｎ??Ｉ?＊?“?：?德…??＞?了?＊＊?ｒ＊ｌ?－?＊＊＊＊＊＊＊＊?Ｔ??５?０?５－?＊＊＊?ｒｈ?ｔ?ｔ?Ｓ?ｏ?ｓ－?…＊?工?Ｉ??－ｆ１！?Ｉ?＂?ｎ?廣１?ｎ?ｎ??Ｏｈ?８ｈ?１ｄ?２ｄ?３ｄ?４ｄ?５ｄ?０?２?４?６?８?１０?ｄ??Ｃ?Ｆ??８－ｉ?ｍｉＲ－１２４?３

?結(jié)果???Ｈ??Ｉ?＿?Ｊ?３?Ｋ??Ｓ?１?｜??｜?＾５］?一１＿?｜?３〇〇１?”＂?…＊?｜?＾０］?…?—??５?２０＇?（＾１?＆?￡?ｒ＾ｌ?Ｉ?｜?３００－?Ｔ??１１５?ｎ?ｒ＊！?ｎ?ｉｔ?，ｘｒ－?１１?－—??ｌ?１〇－?＾?１００－?一?Ａ?Ｉｓ?ｆ］??！?ＩＩＪ．Ｉ?ｌ．ｌ－?ｒ?Ｕｎ?Ｕｎ?ｒ?：ｌｌ．ｂ?ｌ．ｌ?ｎ??ｖｚ々一？令冒？家，??／ＶＶ”?／ＶＶ?，?／Ｖ，，??圖３．?ＲＡＲＧ抑制了?ＲＡ誘導(dǎo)的Ｎ２ａ和Ｐ１９細(xì)胞神經(jīng)元分化中的神經(jīng)突起生長（ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ?１?）。??（Ｈ－Ｋ）用含有ｌｐＭ?ＲＡ的培養(yǎng)基誘導(dǎo)Ｐ１９細(xì)胞分化，并把ｍｉＲ－ｃｏｎｔｒｏｌ＋?ｔｄＴｏｍａｔｏ，??ｍｉＲ－ｃｏｎｔｒｏｌ＋ＲＡＲＧ，?ｍｉＲ－１２４?＋?ｔｄＴｏｍａｔｏ，ｍｉＲ－１２４?＋?ＲＡＲＧ?這?４?組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入誘導(dǎo)后的??Ｐ１９細(xì)胞，并在體外培養(yǎng)的第十天進(jìn)行觀察。（Ｈ）在共聚焦顯微鏡下的Ｐ〗９細(xì)胞神經(jīng)突起??生長的示意圖。比例尺，５０ｐｍ。（Ｉ－Ｋ）在圖３Ｈ所有分組中的神經(jīng)突起數(shù)量（Ｆ?（３，７６）??＝?３．４３１，每組ｎ?＝２０個細(xì)胞），最長的神經(jīng)突起長度（Ｆ?（３，７６）?＝?２８．６８，每組ｎ?＝?２０個??細(xì)胞）和總神經(jīng)突起長度（Ｆ?（３，?７６）?＝?２３．２６，每組ｎ?＝２０個細(xì)胞）的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，＊ｐ?＜０．０５，??＊＊＊ｐ?＜０．００１?和＊＊＊＊ｐ?＜０．０００１。??Ｆｉｇｕｒｅ?３．?ＲＡＲＧ?ｐｒｅｖｅｎｔｓ?ｎｅｕｒｉｔｅ?ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ?ｄｕｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｎ２ａ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3575305