目的以慢病毒載體介導(dǎo)猿猴病毒40（simian virus 40,SV40）大腫瘤抗原（large tumor antigen,TAg）轉(zhuǎn)染原代人肝星狀細胞（hepatic stellate cell,HSC）獲得永生化HSC株。方法以含SV40 TAg cDNA序列的SV40tsA58質(zhì)粒為模板,PCR獲取全長SV40 TAg序列,經(jīng)TOPO克隆進入pENTR^TMTOPO^?載體,PCR鑒定獲得pENTR-SV40 TAg Entrez質(zhì)粒,再經(jīng)LR重組反應(yīng)將SV40 TAg cDNA克隆到目標(biāo)慢病毒載體pLenti4/V5-DEST,PCR鑒定pLenti4/V5-GW/SV40 TAg質(zhì)粒,進一步用該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染工程細胞293FT進行假病毒包裝,用含包裝病毒的細胞培養(yǎng)上清液轉(zhuǎn)染原代人HSC,經(jīng)博來霉素篩選獲得穩(wěn)定表達SV40 TAg的人HSC株（命名為WM07）,并對細胞進行SV40 TAg及α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表達的檢測和鑒定。結(jié)果對pENTR-SV40 TAg Entrez質(zhì)粒及pL... 

【文章來源】：復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2020,47(06)北大核心CSCD

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M13正向引物對p ENTR-SV40 TAg Entrez質(zhì)粒進行PCR測序的結(jié)果

圖2 M13正向引物對p ENTR-SV40 TAg Entrez質(zhì)粒進行PCR測序的結(jié)果圖4 免疫熒光染色永生化HSC株WM07的SV40 TAg表達（×100)

圖3 CMV正向引物對p Lenti4/V5-GW/SV40 TAg慢病毒表達質(zhì)粒進行PCR測序結(jié)果圖5 免疫熒光染色永生化人HSC株WM07的α-SMA的表達（×20)

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人肝臟星狀細胞的一種改良分離方法[J]. 王滿,郭津生,涂傳濤,王吉耀,Scott L.Friedman.  復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2008(04)



本文編號：3560080