豬細小病毒（Porcine parvovirus,PPV）是引起母豬繁殖障礙性疾病重要病原,能夠引起初孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、畸胎和木乃伊胎等,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。PPV基因組主要包括2個開放性閱讀框（Open Reading Frame,ORF）ORF1和ORF2,ORF1主要編碼非結構蛋白NS1和NS2,它們的功能是參與病毒復制及致細胞病變。NS2具有與NS1相同的N末端,且NS2-m RNA是由NS1-m RNA（pre-m RNA,NS2-m RNA的前體m RNA）經(jīng)可變剪接之后產(chǎn)生。宿主蛋白Syncrip是核不均一核糖核蛋白（Heterogenous nuclear ribonucleo proteins,hn RNPs）家族成員之一,與宿主細胞m RNA的轉(zhuǎn)錄、外顯子剪接以及剪接位點的選擇等過程相關,此外還參與了某些肝炎病毒的復制。ORF2主要編碼結構蛋白VP1和VP2,VP2是PPV最主要的衣殼蛋白,占衣殼成分的80%左右,在病毒感染過程中VP2參與了病毒基因組的入核和成熟病毒粒子的組裝。宿主蛋白MCM3是解旋酶MCM家族成員之一,在宿主DNA復制過程中能夠使雙鏈... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

NS蛋白信號肽分析（A）和跨膜區(qū)分析（B）

第三章豬細小病毒非結構蛋白NS多克隆抗體制備23圖3-2NS的結構生物信息學分析A：蛋白α螺旋結構預測（Chou-Fasman法與Gamier-Robson法）；B：蛋白親水性預測（Kyte-Doolittle法）；C：蛋白的柔性區(qū)域預測（Karplus-Schulz法）；D：蛋白潛在的抗原表位預測（Jameson-wolf法）；E：蛋白可能性預測方法（Emini法）Fig.3-2StructurebioinformaticsanalysisofNSproteinA:α-Helixprediction(Chou-FasmanandGamier-Robsonmodels);B:Hydrophilicityprediction(Kyte-Doolittlemodel);C:Flexibleregionsprediction(Karplus-Schulzmodel);D:Antigenicprediction(Jameson-wolfmodel);E:Surfaceprobabilityprediction(Eminimodel)3.3.2重組質(zhì)粒pET-32a-NS的構建和鑒定將擴增出的ns基因克隆入原核表達載體pET-32a上構建重組載體，經(jīng)PCR鑒定擴增出大小約為250bp左右的目的條帶，與預期大小相一致（圖3-3）。進一步將PCR鑒定陽性菌擴大培養(yǎng)，提取質(zhì)粒經(jīng)BamHI和XhoI雙酶切鑒定后分別出現(xiàn)了約6000bp和250bp的條帶，與預期大小相一致（圖3-4），測序鑒定正確。以上結果表明重組質(zhì)粒pET-32a-NS構建成功。圖3-3pET-32a-NS重組質(zhì)粒的PCR鑒定M：DNA標準DL2000plus，1：陰性對照，2~3：pET-32a-NS的PCR鑒定Fig.3-3PCRidentificationofrecombinantplasmidpET-32a-NSM:DNAMarkerDL2000plus,1:Negativecontrol,2~3:PCRidentificationofpET-32a-NS

第三章豬細小病毒非結構蛋白NS多克隆抗體制備23圖3-2NS的結構生物信息學分析A：蛋白α螺旋結構預測（Chou-Fasman法與Gamier-Robson法）；B：蛋白親水性預測（Kyte-Doolittle法）；C：蛋白的柔性區(qū)域預測（Karplus-Schulz法）；D：蛋白潛在的抗原表位預測（Jameson-wolf法）；E：蛋白可能性預測方法（Emini法）Fig.3-2StructurebioinformaticsanalysisofNSproteinA:α-Helixprediction(Chou-FasmanandGamier-Robsonmodels);B:Hydrophilicityprediction(Kyte-Doolittlemodel);C:Flexibleregionsprediction(Karplus-Schulzmodel);D:Antigenicprediction(Jameson-wolfmodel);E:Surfaceprobabilityprediction(Eminimodel)3.3.2重組質(zhì)粒pET-32a-NS的構建和鑒定將擴增出的ns基因克隆入原核表達載體pET-32a上構建重組載體，經(jīng)PCR鑒定擴增出大小約為250bp左右的目的條帶，與預期大小相一致（圖3-3）。進一步將PCR鑒定陽性菌擴大培養(yǎng)，提取質(zhì)粒經(jīng)BamHI和XhoI雙酶切鑒定后分別出現(xiàn)了約6000bp和250bp的條帶，與預期大小相一致（圖3-4），測序鑒定正確。以上結果表明重組質(zhì)粒pET-32a-NS構建成功。圖3-3pET-32a-NS重組質(zhì)粒的PCR鑒定M：DNA標準DL2000plus，1：陰性對照，2~3：pET-32a-NS的PCR鑒定Fig.3-3PCRidentificationofrecombinantplasmidpET-32a-NSM:DNAMarkerDL2000plus,1:Negativecontrol,2~3:PCRidentificationofpET-32a-NS

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]鴨寡腺苷酸合成酶樣蛋白原核表達及多克隆抗體制備[J]. 畢可然,李銀,韓凱凱,趙冬敏,劉青濤,劉宇卓,黃欣梅,楊婧.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2019(23)
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[5]豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的純化及鑒定[J]. 王席,李國攀,陳清清,徐保娟,榮俊.  中國畜牧獸醫(yī). 2019(06)
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博士論文
[1]豬細小病毒誘導豬黃體細胞凋亡及抑制孕酮產(chǎn)生機制研究[D]. 張樑.西北農(nóng)林科技大學 2018
[2]人細小病毒B19非結構蛋白對啟動子的調(diào)控及其出核轉(zhuǎn)運機制研究[D]. 董衍明.華中師范大學 2013

碩士論文
[1]家蠶二分濃核病毒NS1蛋白表達分析及其互作蛋白研究[D]. 劉偉.江蘇大學 2017



本文編號：3560124