大腦皮層內(nèi)部區(qū)域組織高度專業(yè)化,是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分。大腦皮層的生成過程具有時序性和時空特異性。大腦皮層中各層神經(jīng)元可以投射到不同的區(qū)域,發(fā)揮不同的功能,以維持神經(jīng)系統(tǒng)正常的功能。如果產(chǎn)生的神經(jīng)元類型及其分布發(fā)生異常,則會導(dǎo)致眾多臨床上的疾病,如自閉癥,精神分裂癥,癲癇等。所以研究大腦皮層發(fā)育過程中神經(jīng)元精確有序的生成和定位具有重要意義。在實驗室前期工作中,通過原位雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)D6-Cre和hGFAP-Cre介導(dǎo)的Dicer條件性敲除小鼠端腦中均出現(xiàn)了由Dicer敲除導(dǎo)致的microRNA缺失,但是不同Cre介導(dǎo)的條件性敲除小鼠也出現(xiàn)了不同的表型。為了探索其表型差異的原因,我們進(jìn)行了在研究大腦皮層方面應(yīng)用較多的三種Cre工具鼠D6-Cre、Emx1-Cre、hGFAP-Cre表達(dá)特征的比較。在本研究中發(fā)現(xiàn),Emx1-Cre、D6-Cre、hGFAP-Cre工具鼠Cre重組酶在大腦皮層中的起始表達(dá)時間分別為胚胎期第9.5天（即E9.5）、E10.5以后（約為E11）和E12.5。隨著發(fā)育的進(jìn)行,D6-Cre重組酶的表達(dá)始終局限于端腦,而Emx1-Cre和hGFAP-Cre... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Cre工具鼠Cre重組酶檢測原理

鼠Ｘ－ｇａｌ染色結(jié)果；Ｄ和Ｅ為Ｅ１３．５胚胎腦組織Ｘ－ｇａｌ染色結(jié)果。??接下來，�。模叮茫颍骞ぞ呤笈cＲＯＳＡ２６－Ｒ小鼠交配后產(chǎn)生的Ｅ９．５到Ｅ１２．５胚胎，??進(jìn)行Ｘ－ｇａｌ染色。如圖２所示，可以觀察到：Ｅ１０．５天時，并沒有檢測到Ｘ－ｇａｌ著色，??即Ｄ６－Ｃｒｅ的起始表達(dá)時間不是Ｅ１０．５；而在Ｅ１１．５天時，可以檢測到藍(lán)色產(chǎn)物的出??現(xiàn)，即在Ｅ１１．５時，該工具鼠有Ｄ６－Ｃｒｅ重組酶的表達(dá)。這說明Ｄ６－Ｃｒｅ重組酶的表??達(dá)在Ｅ１０．５至丨ＪＥ１１．５之間，與文獻(xiàn)報道并不一致，比文獻(xiàn)中報道時間稍晚。在Ｅ１２．５??時，從胚胎外部進(jìn)行觀察，Ｘ－ｇａｌ著色區(qū)域仍然局限于局大腦皮層；但與Ｅ１１．５胚胎??相比，其著色范圍有所擴(kuò)大。這就是說，Ｅ１２．５時Ｄ６－Ｃｒｅ重組酶的表達(dá)范圍有所擴(kuò)??大，但仍局限于大腦皮層，且在胚胎端腦外其它部位沒有表達(dá)。??２８??

２．?Ｄ６－Ｃｒｅ工具鼠Ｃｒｅ重組酶表達(dá)存在個體差異??在用Ｘ－ｇａｌ染色方法對Ｄ６－Ｃｒｅ工具鼠表達(dá)的Ｃｒｅ重組酶進(jìn)行檢測時，觀察到??Ｄ６－Ｃｒｅ的表達(dá)存在個體差異性。如圖３所示，從Ｅ１１．５同窩８只Ｄ６－Ｃｒｅ／ｌａｃＺ小鼠??胚胎的Ｘ－ｇａｌ染色結(jié)果中，可以看出Ｘ－ｇａｌ顯色部位雖然均于大腦皮層上，但是其??具體范圍和顯色程度有很大差異。圖２Ａ到２Ｃ中小鼠Ｘ－ｇａｌ顯色程度較高，圖２Ｄ??到２Ｈ中Ｘ－ｇａｌ顯色程度較低，甚至在２Ｈ中Ｘ－ｇａｌ的顯色極其微弱。這一結(jié)果提示??Ｄ６－Ｃｒｅ的表達(dá)范圍和表達(dá)程度存在個體差異性。??２９??


本文編號：3549797