目的探討體外培養(yǎng)的3T3L1脂肪前體細(xì)胞溶酶體損傷對其外泌體分泌的影響。方法將在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h的3T3L1細(xì)胞設(shè)為對照組;采用Lamp2 shRNA沉默3T3L1細(xì)胞中的Lamp2基因表達(dá)（Lamp2敲除組）,并同時給與NH₄Cl（NH₄Cl組）刺激破壞溶酶體功能。Western blotting、免疫熒光染色檢測沉默效應(yīng);Lysotracker染色檢測溶酶體功能;外泌體定量檢測試劑盒進(jìn)行外泌體定量計數(shù)分析;Western blotting檢測細(xì)胞外泌體相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)果 NH₄Cl組細(xì)胞酸性溶酶體數(shù)量少于對照組（P<0.05）。與對照組比較,NH₄Cl組細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體數(shù)量無明顯變化,細(xì)胞中外泌體發(fā)生相關(guān)蛋白Annexin A2、CD63、CD81的轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平均無明顯改變（P>0.05）。Lamp2敲除組細(xì)胞酸性溶酶體數(shù)量及Lamp2蛋白水平、熒光數(shù)量和強(qiáng)度均明顯低于對照組（P<0.05）。與對照組比較,Lamp2敲除組細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體數(shù)量無明顯變化,細(xì)... 

【文章來源】：臨床軍醫(yī)雜志. 2020,48(05)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

對照組與NH4Cl組細(xì)胞溶酶體Lysotracker染色結(jié)果比較(a.對照組;b.NH4Cl組)

2.4 對照組與Lamp2敲除組細(xì)胞外泌體分泌情況比較 電鏡下,外泌體形態(tài)良好。與對照組比較,Lamp2敲除組細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體數(shù)量無明顯變化,細(xì)胞中外泌體發(fā)生相關(guān)蛋白Annexin A2、CD63、CD81的轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平均無明顯改變(P>0.05)。見圖4。圖3 對照組與Lamp2敲除組蛋白敲除效率及細(xì)胞酸性溶酶體數(shù)量、熒光數(shù)量和強(qiáng)度比較

對照組與Lamp2敲除組蛋白敲除效率及細(xì)胞酸性溶酶體數(shù)量、熒光數(shù)量和強(qiáng)度比較

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]外泌體提取方法及鑒定分析研究進(jìn)展[J]. 賀嬌,許潑實(shí).  中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2018(07)



本文編號：3514769