目的探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）源胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）對施萬細(xì)胞（schwann cells,SCs）增殖和遷移的影響,為修復(fù)周圍神經(jīng)損傷提供新的治療方向和新的思路。本課題通過提取、培養(yǎng)人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞胞外囊泡并與大鼠坐骨神經(jīng)的SCs相互作用,從體外、體內(nèi)證實hUCMSC-EVs促進(jìn)SCs的增殖與遷移,促進(jìn)受損神經(jīng)的修復(fù),為組織工程應(yīng)用胞外囊泡修復(fù)受損周圍神經(jīng)的研究提供理論依據(jù)與實踐探索。方法（1）人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和鑒定。（2）應(yīng)用超高速離心法從hUCMSCs上清液中分離和純化EVs（hUCMSC-EVs）,透射電鏡觀察EVs形態(tài)特征。Western blot法檢測EVs標(biāo)志性蛋白CD63和CD9的表達(dá)。（3）施萬細(xì)胞（Schwann cell,SCs）提取及鑒定。（4）通過CCK-8和Transwell^TM小室實驗檢測不同濃度的hUCMSC-EVs對SCs增殖和遷移能力的影響。（5）共聚焦顯微鏡觀察原代SC... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

A、B原代hUCMSC的提取，A為P0代形態(tài)，B為P4代形態(tài)；Figure3.1：ExtractionofhUCMSCs；A：ThemorphologyofP0generation；B：ThemorphologyofP4

人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的胞外囊泡對施萬細(xì)胞增殖和遷移影響的研究16圖3.1A、B原代hUCMSC的提取，A為P0代形態(tài)，B為P4代形態(tài)；Figure3.1：ExtractionofhUCMSCs；A：ThemorphologyofP0generation；B：ThemorphologyofP4generation.圖3.2hUCMSCs茜素紅、油紅O染色以及流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果分析Figure3.2AandB:MorphologyofhUCMSCs(passages0and3)underlightmicroscopy(×100magnification).CandD:hUCMSCsinducedfordifferentiationintoosteocytes(×100)andadipocytes(×200).CellsstainedwithAlizarinRedandOilredO.E:ResultsfortheflowcytometryanalysesofphenotypicmarkersrelatedtohUCMSCs.

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文173.4.2人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的胞外囊泡(hUCMSC-EVs)的鑒定EVs是由細(xì)胞膜分離的納米級膜泡，具有亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，負(fù)載多種生物活性物質(zhì)（蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA）介導(dǎo)細(xì)胞間信息通訊[19]。來源于不同細(xì)胞的EVs具有多種生物學(xué)功能，例如細(xì)胞增殖、存活和轉(zhuǎn)化，其在組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已被廣泛關(guān)注[19]。透射電鏡結(jié)果顯示，hUCMSC-EVs呈圓形或橢圓形（圖3.3A）；我們前期的研究結(jié)果表明，hUCMSC-EVs的粒徑范圍在80-650nm，平均粒徑為168nm。hUCMSCs和hUCMSC-EVs均表達(dá)胞外囊泡特異性標(biāo)志蛋白CD9和CD63（圖3.3B）。結(jié)果證實，本研究提取的hUCMSC-EVs具備典型細(xì)胞外囊泡的基本特性。..圖3.3A：透射電鏡觀察hUCMSC-EVs形態(tài)特征，標(biāo)尺：100nm，（黑色箭頭指示為EVs）；B：蛋白質(zhì)印跡檢測hUCMSC-EVs標(biāo)志CD9、CD63表達(dá)；Figure3.2A：MorphologicalcharacteristicsofhUCMSC-EVswereobservedbytransmissionelectronmicroscopy,size:100nm,（BlackarrowisEVs）；B：FilteredEVswereresuspendedinPBS,incubatedandstainedwith20μLofthedirectlyfluorescentantibodyCD63(BDBiosciences)forthedetectionofthetypicalsurfacemarkersofhUCMSC-EVs.3.5討論間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells,MSCs）是一類具有多向分化潛能并能進(jìn)行不斷自我更新的成體干細(xì)胞[20]。最近的報告發(fā)現(xiàn)MSC分泌可以分為三類：細(xì)胞外囊泡（如微泡）、微囊（MVs）和外泌體。MSCs能夠分泌生物活性物質(zhì)，幫助重建神經(jīng)損傷后再建的微環(huán)境[21]。鑒于這些特點(diǎn)，MSCs被認(rèn)為是很有前途的神經(jīng)損傷修復(fù)和再生的工具[22]。間充質(zhì)干細(xì)胞的再生潛能由旁分泌作用介導(dǎo)[23]。hUCMSCs的旁分泌途徑比BMSC等作用更強(qiáng)[24]。越來越多的證據(jù)表明，hUCMSCs在周圍神經(jīng)損傷


本文編號：3474719