發(fā)布時間：2021-10-30 16:28

　　為了確定素馨屬植物ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系,以素馨屬植物葉片為材料,采用單因素試驗和正交試驗設(shè)計2種方法對影響素馨屬ISSR-PCR反應(yīng)中的dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA以及Mg²⁺ 5個因素進行4個水平的優(yōu)化試驗,通過試驗建立了素馨屬25μL最佳反應(yīng)體系:dNTPs濃度為0.10 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量2.5 U、引物濃度為0.7μmol/L、模板DNA用量為2.5 ng、Mg²⁺濃度為1.0 mmol/L。在最佳反應(yīng)體系下,從100條ISSR引物中篩選出了8條ISSR引物,并確定了各引物的最佳退火溫度。利用29份素馨屬材料進行最佳反應(yīng)體系的驗證,結(jié)果表明,該優(yōu)化體系擴增條帶清晰,穩(wěn)定性高,重復(fù)性好,表明該反應(yīng)體系適用于素馨屬植物ISSR分子標(biāo)記的研究。本研究可為素馨屬植物遺傳多樣性以及親緣關(guān)系等方面的研究提供參考依據(jù)。 

【文章來源】：江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(23)

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 試驗方法
        1.2.1 供試材料DNA提取與檢測
        1.2.2 ISSR-PCR反應(yīng)體系單因素篩選試驗
        1.2.3 ISSR-PCR反應(yīng)體系正交試驗設(shè)計
        1.2.4 引物及其退火溫度的篩選
        1.2.5 ISSR-PCR最佳體系的驗證
2 結(jié)果與分析
    2.1 單因素試驗優(yōu)化結(jié)果
        2.1.1 dNTPs濃度對ISSR-PCR擴增體系的影響
        2.1.2 Taq DNA聚合酶用量對ISSR-PCR擴增體系的影響
        2.1.3 引物濃度對ISSR-PCR擴增體系的影響
        2.1.4 模板DNA用量對ISSR-PCR擴增體系的影響
        2.1.5 Mg2+濃度對ISSR-PCR擴增體系的影響
    2.2 正交試驗設(shè)計瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
    2.3 正交試驗設(shè)計瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖直觀評分
    2.4 正交設(shè)計試驗因素內(nèi)各處理水平對PCR擴增結(jié)果的影響
        2.4.1 dNTPs濃度對PCR擴增體系的影響
        2.4.2 Taq DNA聚合酶用量對PCR擴增體系的影響
        2.4.3 引物濃度對PCR擴增體系的影響
        2.4.4 Mg2+濃度對PCR擴增體系的影響
        2.4.5 模板DNA用量對PCR擴增體系的影響
    2.5 引物及其退火溫度的篩選
    2.6 優(yōu)化后ISSR-PCR反應(yīng)體系穩(wěn)定性檢測
3 討論與結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]茉莉花磷酸甲羥戊酸激酶基因克隆及表達分析[J]. 陳笛,王鵬杰,鄭玉成,鄭知臨,陳桂信,葉乃興.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2018(10)
[2]扭肚藤UPLC指紋圖譜建立及2種成分測定[J]. 胥愛麗,畢曉黎,劉布鳴,江潔怡,陳昭,丁平.  中成藥. 2018(03)
[3]茉莉花JsPAL2基因的克隆與表達分析[J]. 熊青,宋姣敏,崔萌,許穎妍,俞瀅,葉乃興,陳桂信.  熱帶作物學(xué)報. 2018(07)
[4]采用正交設(shè)計方法優(yōu)化觀賞桃ISSR-PCR反應(yīng)體系[J]. 肖琳,曾艷玲,劉衛(wèi)東.  經(jīng)濟林研究. 2017(04)
[5]基于ISSR分子標(biāo)記的郁金香品種遺傳多樣性分析[J]. 巨秀婷,阿啟蘭,侯志強,蔣福娟.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2017(07)
[6]基于廣西茉莉產(chǎn)業(yè)的農(nóng)業(yè)科普教育分析[J]. 周錦業(yè),宋倩,李春牛,關(guān)世凱,張自斌,卜朝陽.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(05)
[7]基于ISSR標(biāo)記的20種荷花品種資源遺傳多樣性分析[J]. 何天友,沈少炎,瞿印權(quán),陳凌艷,劉穎嘉,榮俊冬,鄭郁善.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(06)
[8]28份茉莉花種質(zhì)基于TRAP技術(shù)的遺傳多樣性分析[J]. 劉忠,楊波,楊玉國,羅明.  分子植物育種. 2017(01)
[9]黔產(chǎn)寬葉纈草ISSR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J]. 錢志瑤,周道堂,黃秀平,周鎂,陳祖云,覃容貴.  生物技術(shù)通報. 2015(07)
[10]葡萄種質(zhì)資源ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J]. 代培紅,朱瑜,姚正培,李瑋璐,馬麗,羅淑萍.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2013(08)

碩士論文
[1]基于形態(tài)性狀和ISSR標(biāo)記的朱頂紅品種遺傳多樣性分析及ISSR指紋圖譜構(gòu)建[D]. 張林.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]武陵山區(qū)茶樹種質(zhì)資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系的ISSR分析[D]. 盧莉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3467055