為了確定素馨屬植物ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系,以素馨屬植物葉片為材料,采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)2種方法對(duì)影響素馨屬ISSR-PCR反應(yīng)中的dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA以及Mg²⁺ 5個(gè)因素進(jìn)行4個(gè)水平的優(yōu)化試驗(yàn),通過(guò)試驗(yàn)建立了素馨屬25μL最佳反應(yīng)體系:dNTPs濃度為0.10 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量2.5 U、引物濃度為0.7μmol/L、模板DNA用量為2.5 ng、Mg²⁺濃度為1.0 mmol/L。在最佳反應(yīng)體系下,從100條ISSR引物中篩選出了8條ISSR引物,并確定了各引物的最佳退火溫度。利用29份素馨屬材料進(jìn)行最佳反應(yīng)體系的驗(yàn)證,結(jié)果表明,該優(yōu)化體系擴(kuò)增條帶清晰,穩(wěn)定性高,重復(fù)性好,表明該反應(yīng)體系適用于素馨屬植物ISSR分子標(biāo)記的研究。本研究可為素馨屬植物遺傳多樣性以及親緣關(guān)系等方面的研究提供參考依據(jù)。 

【文章來(lái)源】：江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(23)

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 供試材料DNA提取與檢測(cè)
        1.2.2 ISSR-PCR反應(yīng)體系單因素篩選試驗(yàn)
        1.2.3 ISSR-PCR反應(yīng)體系正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.2.4 引物及其退火溫度的篩選
        1.2.5 ISSR-PCR最佳體系的驗(yàn)證
2 結(jié)果與分析
    2.1 單因素試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果
        2.1.1 dNTPs濃度對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.1.2 Taq DNA聚合酶用量對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.1.3 引物濃度對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.1.4 模板DNA用量對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.1.5 Mg2+濃度對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增體系的影響
    2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果
    2.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖直觀評(píng)分
    2.4 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素內(nèi)各處理水平對(duì)PCR擴(kuò)增結(jié)果的影響
        2.4.1 dNTPs濃度對(duì)PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.4.2 Taq DNA聚合酶用量對(duì)PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.4.3 引物濃度對(duì)PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.4.4 Mg2+濃度對(duì)PCR擴(kuò)增體系的影響
        2.4.5 模板DNA用量對(duì)PCR擴(kuò)增體系的影響
    2.5 引物及其退火溫度的篩選
    2.6 優(yōu)化后ISSR-PCR反應(yīng)體系穩(wěn)定性檢測(cè)
3 討論與結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3467055