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果蠅miR-210調(diào)控脂質(zhì)代謝以及維持感光神經(jīng)元結(jié)構(gòu)與功能的分子機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2021-10-22 15:49
  Micro RNAs(miRNAs)是一類(lèi)生物體內(nèi)豐富存在的長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,并通過(guò)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控抑制基因的表達(dá)。近年來(lái),多項(xiàng)研究表明miRNAs在維持神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能方面發(fā)揮重要作用。miRNAs調(diào)控失衡與多種神經(jīng)退行性疾病密切相關(guān)。發(fā)現(xiàn)新的神經(jīng)系統(tǒng)特異性miRNAs及鑒定其在各類(lèi)神經(jīng)元中的作用機(jī)制對(duì)于理解基本的神經(jīng)發(fā)育過(guò)程以及神經(jīng)元退化機(jī)制至關(guān)重要。miR-210屬于一個(gè)在不同物種中高度保守miRNAs家族。早期研究發(fā)現(xiàn)miR-210在低氧誘導(dǎo)情況下高表達(dá),并調(diào)控多種生物學(xué)過(guò)程。多項(xiàng)研究也表明miR-210在包括乳腺癌,骨肉瘤和肺癌等多種癌癥組織中高表達(dá)并在癌癥的發(fā)生發(fā)展起到重要作用。盡管如此,miR-210的生理學(xué)功能并不完全清楚。本文研究發(fā)現(xiàn)miR-210能夠調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝并維持果蠅眼睛的結(jié)構(gòu)與功能,阻止感光神經(jīng)元(photoreceptor)退化。miR-210在包括眼睛在內(nèi)的多種果蠅感覺(jué)器官中特異性表達(dá)。利用CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建的miR-210缺失突變體—miR-210Δ130,其成蟲(chóng)眼睛結(jié)構(gòu)存在缺陷,感光神經(jīng)元R1-R7提... 

【文章來(lái)源】:浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:140 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
致謝
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 miRNAs研究進(jìn)展
        1.1.1 miRNAs的研究歷史
        1.1.2 miRNAs的生物合成機(jī)制
        1.1.3 miRNAs的作用機(jī)制
        1.1.4 鑒定miRNAs的靶標(biāo)基因
        1.1.5 miRNAs的功能
            1.1.5.1 miRNAs與心血管疾病(心臟重塑)
            1.1.5.2 miRNAs與炎癥反應(yīng)
            1.1.5.3 miRNAs與血管生成
            1.1.5.4 miRNAs與代謝
            1.1.5.5 miRNAs與癌癥
            1.1.5.6 miRNAs與神經(jīng)系統(tǒng)
            1.1.5.7 miRNAs與病毒
        1.1.6 miRNAs與感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)
    1.2 miR-210研究進(jìn)展
        1.2.1 miR-210 與低氧的聯(lián)系:miR-210與HIF形成正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制
        1.2.2 miR-210 與疾病:miR-210 可以作為腫瘤檢測(cè)的標(biāo)記物
        1.2.3 miR-210與感覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)
        1.2.4 果蠅miR-210研究進(jìn)展
    1.3 模式生物:果蠅
        1.3.1 果蠅作為模式生物的優(yōu)勢(shì)
        1.3.2 模式生物果蠅研究工具
        1.3.3 研究模型:果蠅成蟲(chóng)眼睛
        1.3.4 脂質(zhì)代謝對(duì)果蠅眼睛功能的影響
    1.4 SREBP研究進(jìn)展
    1.5 ACS研究進(jìn)展
2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 果蠅相關(guān)實(shí)驗(yàn)
        2.1.1 果蠅培養(yǎng)方法及實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.2 果蠅基因組DNA粗提取
        2.1.3 果蠅基因組DNA精提取
        2.1.4 果蠅total RNA提取
        2.1.5 果蠅miRNAs提取
        2.1.6 果蠅蛋白質(zhì)提取
        2.1.7 果蠅顯微注射
        2.1.8 果蠅幼蟲(chóng)組織解剖及免疫熒光染色
        2.1.9 果蠅成蟲(chóng)眼睛組織解及免疫熒光染色
        2.1.10 果蠅組織透射電鏡樣品制備方法
    2.2 分子生化實(shí)驗(yàn)
        2.2.1 CRISPR-Cas9
        2.2.2 脂質(zhì)組學(xué)分析(Lipid-MS)
        2.2.3 PCR
        2.2.4 割膠回收
        2.2.5 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.6 轉(zhuǎn)化
        2.2.7 質(zhì)粒小抽
        2.2.8 質(zhì)粒大抽
        2.2.9 qRT-PCR(total RNA)
        2.2.10 miRNAs qRT-PCR
        2.2.11 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析(RNA-Seq)
        2.2.12 BCA測(cè)定蛋白濃度
        2.2.13 免疫印跡實(shí)驗(yàn)Western Blot
        2.2.14 DLR雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 miRNAs篩選
    3.2 miR-210在果蠅感光神經(jīng)元中表達(dá)
    3.3 miR-210在其他感覺(jué)神經(jīng)元中表達(dá)
    3.4 miR-210KO-GAL4 突變體眼睛存在嚴(yán)重缺陷
    3.5 miR-210缺失導(dǎo)致果蠅成蟲(chóng)感光神經(jīng)元產(chǎn)生缺陷
    3.6 miR-210從蛹期開(kāi)始影響果蠅眼睛發(fā)育
    3.7 miR-210缺失加速感光神經(jīng)元退化
    3.8 miR-210缺失導(dǎo)致眼睛脂滴累積
    3.9 miR-210調(diào)控脂質(zhì)代謝
    3.10 miR-210 通過(guò)SREBP通路調(diào)控脂質(zhì)代謝
    3.11 miR-210的RNA-Seq結(jié)果分析
    3.12 ACS是 miR-210 的靶標(biāo)基因
4 討論
5 創(chuàng)新與不足
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào):3451408

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