目的:采用基因敲除斑馬魚模型,觀測microRNA-1（miR-1）對神經(jīng)嵴細胞（neural crest cell,NCC）和顱面發(fā)育的影響。方法:用CRISPR/Cas9基因敲除系統(tǒng)敲除斑馬魚miR-1,觀察其神經(jīng)嵴衍生物的表型。原位雜交檢測NCC誘導(dǎo)分化相關(guān)基因的表達,并用實時定量PCR（qRT-PCR）等檢驗與凋亡相關(guān)基因的表達。結(jié)果:基因敲除組斑馬魚下頜骨嚴重萎縮,色素細胞延遲出現(xiàn)。原位雜交顯示,受精后24 h,tfap2a、dlx3b、ngn1和snailb表達下降。qRT-PCR結(jié)果證明miR-1影響凋亡相關(guān)基因的表達。結(jié)論:miR-1參與NCC的調(diào)控進而影響顱面發(fā)育,其可能通過凋亡相關(guān)通路而發(fā)揮作用。 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 斑馬魚mi R-1基因敲除F5純合突變體鑒定
        1.2.2 阿爾新藍染色
        1.2.3 整胚原位雜交
        1.2.4 q RT-PCR
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 純合子斑馬魚基因型鑒定
    2.2 mi R-1敲除后斑馬魚的表型變化
    2.3 與斑馬魚顱面硬組織有關(guān)的基因原位雜交
    2.4 q RT-PCR檢測凋亡相關(guān)基因
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]麥考酚酸對斑馬魚胚胎顱面部發(fā)育的影響[J]. 楊迷芳,馬蘭,嚴冬琳,蔣玲玲.  口腔醫(yī)學(xué). 2019(02)
[2]過表達miR-155對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響[J]. 黃夢圓,李德利,張加良,袁櫟,王暉.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(08)



本文編號：3445472