大腸桿菌sRNA EsrE可以維持細(xì)胞在有氧條件下的正常生長(zhǎng),固體平板上的生長(zhǎng)形態(tài)以及對(duì)不同抗生素的敏感性等多種表型,并且參與輔酶Q8的合成。實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)于esrE基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控進(jìn)行了初步的探索,識(shí)別多個(gè)順式調(diào)控元件,并在此基礎(chǔ)上篩選得到54種潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,本研究主體內(nèi)容是驗(yàn)證潛在轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子對(duì)EsrE調(diào)控功能并明確其調(diào)控機(jī)制。研究中首先完善了實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的雙質(zhì)粒報(bào)告基因（lacZ）系統(tǒng),并利用該系統(tǒng)逐一驗(yàn)證了潛在轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的調(diào)控功能,研究結(jié)果表明FabZ與RpoH可以調(diào)控EsrE的轉(zhuǎn)錄。FabZ為脂肪酸生物合成中的β-羥酰-ACP脫水酶,雙質(zhì)粒系統(tǒng)表明其可下調(diào)EsrE的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)一步的凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn),其不能直接和EsrE啟動(dòng)子區(qū)域的DNA片段結(jié)合,即其不具有DNA結(jié)合活性,故關(guān)于FabZ如何精確調(diào)控EsrE的轉(zhuǎn)錄還有待研究。RpoH為RNA聚合酶的σ亞基,雙質(zhì)粒系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RpoH能上調(diào)EsrE的轉(zhuǎn)錄,而凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn),該蛋白在RNA聚合酶核心酶的協(xié)同作用下能直接和EsrE啟動(dòng)子區(qū)域的DNA片段結(jié)合,即RpoH能以RNA聚合酶σ亞基形式啟動(dòng)EsrE的轉(zhuǎn)錄�；�... 

【文章來(lái)源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

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【部分圖文】：

圖１．２?ｈＷ■／推測(cè)功能示意圖ｌ１７ｌ??Ｆｉｇ．?１．２?ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｕｂｉＪ?ｌｏｃｕｓ１１７１????ｕｈｉＪ?６０６?ｂｐ????

ｓｓ?ＩＩ）相互作用來(lái)發(fā)揮調(diào)控功能［氣然而大腸桿菌體內(nèi)ＲＮＡ聚合酶頻繁“奔??波”于各轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子之間，啟動(dòng)不同基因的轉(zhuǎn)錄，所以為提髙兩者的作用效率，兩者??蛋白－蛋白相互作用力通常相對(duì)微弱，另外，可以通過(guò)提高靶基因啟動(dòng)子周?chē)D(zhuǎn)錄調(diào)控??因子的濃度促進(jìn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與ＲＮＡ聚合酶的結(jié)合。除此之外，大約２０－３０種轉(zhuǎn)錄調(diào)??控因子直接結(jié)合ＲＮＡ聚合酶（ｃｌａｓｓ?ＩＩＩ和ｃｌａｓｓ?ＩＶ）。這種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子通常與ｐ或者Ｐ’??亞基結(jié)合，即使在延伸過(guò)程中也可以控制ｍＲＮＡ的衰減、延伸和終止（圖１．４）。??＜〇％２ＳＳ？?１；??Ｆ？ｄ?ｆａｃｔｏｒ＊?ｊ￡＇?．??梅Ｂ■■費(fèi)＆??Ｃｏｒ？?？ｎｚｙｍ＊?Ｍｏ＊ｏｗ？ｙｍ？?＊？?ｒ?ｆＫｔ〇??—ｉＷｆｆｉｌ?ＩＭ．Ｍ—ｍｉｗ??圖１．４大腸桿菌ＲＮＡ聚合酶的功能分化??Ｆｉｇ．?１．４?Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｉＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ?ＲＮＡ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ??ＤＮＡ結(jié)合型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一般由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，一是功能域，另一是ＤＮＡ結(jié)合??域。在原核生物中，ＨＴＨ?（ｈｅｌｉｘ－ｔｕｍ－ｈｅｌｉｘ）結(jié)構(gòu)是調(diào)控因子ＤＮＡ結(jié)合域中最常見(jiàn)的形??式。??根據(jù)作用效果的不同，轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一般分為轉(zhuǎn)錄激活因子和轉(zhuǎn)錄抑制因子。其中，??對(duì)于轉(zhuǎn)錄抑制因子而言，當(dāng)細(xì)胞中誘導(dǎo)物不存在時(shí)，其可以與調(diào)控序列結(jié)合，使周?chē)??啟動(dòng)子不能啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄；當(dāng)存在誘導(dǎo)物，誘導(dǎo)物與抑制因子結(jié)合，使其從靶ＤＮＡ區(qū)??域脫離，啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性恢復(fù)。相比之下，轉(zhuǎn)錄激活因子需要效應(yīng)配體的參與才能完??

華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文?第７頁(yè)??Ａ１７８－２０１?Ｕ４５Ｐ??［ｒｐｏＨｌ６２）??Ｄ１７９Ｇ?、?Ｗ２４４Ｒ、?Ｕ２７０Ｒ??（ｒｐｏＨＩＩＩ）?｛ｔｐｏＨｉｅｎ?（ｒｐｏＨ１￥３）??Ｆ１３８Ｌ?Ｌ１６１Ｐ?＼?Ｒ２４３Ｃ?＼?Ｌ２Ｔ８Ｗ??０ｐｏＨ１７＾｛ｒｐｏＨ１Ｂ２）?（ｒｐｏＨ１７４）?（ｒｐｔ＾１１２）??ｉ?■ｉｘＷＫ／ｉ?ｐｓＡ＾Ｆ＾ｖｓｎ??１．２?２．１?２．２?２．３?２．４?￣Ｔ￣?３．１?３．２?４．１?４．２??ＲｐｏＨ?ｂｏｘ??圖１．５?ａ３２的保守區(qū)域示意圖??Ｆｉｇ．?１．５?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ?ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?ａ３２??１．３．１?ａ３２轉(zhuǎn)錄調(diào)控??基因ｒｐｏ／／的調(diào)控是非常復(fù)雜的，包括三個(gè)層面：轉(zhuǎn)錄、翻譯及翻譯后修飾［３２，３３］。??從轉(zhuǎn)錄水平而言，ｒｐｏ／／編碼基因上游５種啟動(dòng)子（Ｐｌ，Ｐ３－Ｐ６）可以被不同的ｃｒ識(shí)別并??受到多種操縱子的調(diào)控（圖１．６），其中Ｐ４和Ｐ５由ａ７Ｇ轉(zhuǎn)錄，Ｐ３和Ｐ６可以結(jié)合ａ２４和ａ５４，??然而Ｐ１可以根據(jù)生長(zhǎng)期選擇ａ７Ｑ或ａｓ介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄［３４＾］，另外，Ｐ６啟動(dòng)子對(duì)代謝產(chǎn)物敏感且??其轉(zhuǎn)錄依賴(lài)于胞內(nèi)ｃＡＭＰ的水平和ＣＲＰ催化劑［３７ｌｃＡＭＰ－ＣＲＰ與ＣｙｔＲ抗催化劑形成復(fù)??合結(jié)構(gòu)從而掩蓋Ｐ３、Ｐ４和Ｐ５［４１］。同樣地，涉及起始染色體ＤＮＡ復(fù)制的ＤＮＡ結(jié)合蛋??白ＤｎａＡ，通過(guò)抑制Ｐ３和Ｐ４的轉(zhuǎn)錄參與調(diào)控的轉(zhuǎn)錄（圖１．６）?［４２］。這些效應(yīng)因子??和轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子響應(yīng)各種環(huán)境信號(hào)和狀況，調(diào)控ｒｐｏ／／的轉(zhuǎn)錄，并且在壓力反應(yīng)中有廣??泛的適用性。??（ｃ＾Ｒ）??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大腸桿菌yigP基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列的鑒定[J]. 汪屹,葉江,張惠展.  微生物學(xué)報(bào). 2012(05)
[2]Fat poetry: a kingdom for PPARγ[J]. Silvia I Anghel,Walter Wahli.  Cell Research. 2007(06)



本文編號(hào)：3433860