發(fā)布時(shí)間：2021-10-08 17:14

　　人參皂苷是人參的主要有效成分,具有多種藥理活性,例如:抗炎癥、抗過敏、治療糖尿病和抗氧化等。人參中,糖基化人參皂苷是主要組成部分,而去糖基的稀有人參皂苷含量很低或不存在。相比之下,去糖基化的稀有人參皂苷具有更強(qiáng)地藥理活性。因此,稀有人皂苷的制備受到了廣泛關(guān)注。目前,稀有人參皂苷的制備主要利用酸或堿處理等化學(xué)法和微生物或酶催化等生物學(xué)方法水解糖鏈。然而利用化學(xué)法水解人參皂苷,會(huì)產(chǎn)生副產(chǎn)物和污染環(huán)境,無法滿足藥用標(biāo)準(zhǔn)。因此,以微生物細(xì)胞和重組皂苷水解酶為代表的生物轉(zhuǎn)化法被認(rèn)為是獲得稀有人參皂苷最有效的方法之一。以此為契機(jī),本論文以酒曲為載體,挖掘酒曲微生物中轉(zhuǎn)化人參皂苷的功能菌株和皂苷水解酶。本論文主要的研究內(nèi)容如下:（1）對人參皂苷誘導(dǎo)酒曲進(jìn)行高通量測序,分析酒曲中潛在的可轉(zhuǎn)化人參皂苷的微生物群落結(jié)構(gòu)與優(yōu)勢類群;同時(shí),對人參皂苷誘導(dǎo)酒曲進(jìn)行固體發(fā)酵,利用TLC檢測固體發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)而分析酒曲微生物對人參皂苷的轉(zhuǎn)化能力;（2）采用直接稀釋涂板法和固體發(fā)酵誘導(dǎo)法從酒曲中分離和鑒定功能菌株;（3）從功能菌株中克隆皂苷水解酶基因,構(gòu)建pET-30a和pET-32a重組表達(dá)載體,并進(jìn)行原核異源表達(dá)和酶... 

【文章來源】：云南大學(xué)云南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１人參皂苷骨架及其各糖配基ｗ??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ?ｇｌｙｃｏｌｉｇａｎｄｓ??

酶分又細(xì)分為?ＩＩ－ｉ－１?型、ＩＩ－ｉ－２?型、ＩＩ－ｉ－３?型、ＩＩ－ｉ－４?型和?ＩＩ－?ｉｉ?型［２］（圖?１－２Ａ）。??在去糖基化的過程中，根據(jù)５類皂苷水解酶在不同位置上去糖基順序的不同，可??以將其水解模式分為Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ和Ｆ６種模式（圖１－２Ｂ）。??Ｉ型人參皂苷水解酶可同時(shí)水解ＰＰＤ型人參皂苷中與Ｃ－２０和Ｃ－３連接的糖，??并普遍具有Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ水解模式。來源于０＞�。�?／／ｗ〇？的皂苷水解酶在轉(zhuǎn)化??人參皂苷Ｒｂ丨、Ｒｂ２和Ｒ〇生成Ｒｇ３時(shí)，其該酶具有Ａ、Ｂ的水解模型［３３］。Ｑｕａｎ??和Ｎｏｈ等利用人參皂苷水解酶Ｉ轉(zhuǎn)化人參皂苷Ｒｂ＾Ｒｂ＾Ｒｂｓ和Ｒｃ生成Ｃ－Ｋ時(shí)，??該類酶則具有Ａ、Ｃ和Ｄ水解模型［３４—３７］。??ＩＩ型人參皂苷水解酶分別水解在ＰＰＤ和ＰＰＴ型人參皂苷中與Ｃ－２０連接的糖。??人參皂苷水解酶ＩＩ－ｉ－１只水解與Ｃ－２０連接的外部葡萄糖而不水解與Ｃ－?２０連接的??內(nèi)部葡萄糖，水解模式為Ａ－１；人參皂苷水解酶ＩＩ－ｉ－２則水解與Ｃ－２０連接的外部??阿拉伯吡喃糖，水解模式為Ａ－２；?ＩＩ－ｉ－３具有Ａ－３水解模式，主要水解與Ｃ－２０連??接的外部木糖，但不會(huì)在ＰＰＤ型人參皂苷中進(jìn)一步水解；ＩＩ－ｉ－４水解與Ｃ－２０連??接的外部阿拉伯呋喃糖而不水解與Ｃ－２０連接的內(nèi)部葡萄糖，其水解模式為Ａ－４；??另外

?Ｊ?Ｖ?／??圖１－２人參皂酶的分類⑴??Ｆｉｇ?１－２?Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄａｓｅｓ??１．２．２人參皂苷糖基水解酶的酶學(xué)性質(zhì)??人參皂苷水解酶水解酶酶學(xué)性質(zhì)各異，Ｋｉｍ等報(bào)道的葡萄糖苷酶，在２５°Ｃ，??具有最適催化活性［３８］。相反，來源于＊Ｓｍ價(jià)／ｏｉｗ?ａｃ／ｉ／ｏｏｊ／ｉ／ｆｌｒｆＭＳ的熱穩(wěn)定性葡萄糖??Ｈ＇觸，Ｋ－ｉｉ適溫度尚８０°Ｃ］。而來源于?Ｃ？／（：／／＿ｃｅ／／〃／ｆｗ／ｒ＂ｐ／ｗ＇．ｗｃ．ｃ＿Ａ＾＾??拉ｆｌ’丨吹喃糖?酶和?＂奶ｗａ？／ｃ．ｃ＿／仙？〇／＃??最佳催化溫度為６０°Ｃｔ３９，４（）ｌ。另外，來源千真菌和人參的人參皂苷水解酶，最大??活性溫度范圍是在３７°Ｃ－６５°Ｃ【２Ｑ，４Ｍ４］。??一般來說，人參皂＿Ｈ：水解酶的最適ｐＨ值在３．５?￣?８．０，然而，當(dāng)ｐＨ值高于??８．０時(shí)，酶活性顯著降低。來源于Ｐａｅｃ／／ｏｍ＿ｙｃｅｓ?５ｆｌ／ｗ＿ｅｒ的葡萄糖苷酶的最適ｐＨ??值為?３．５丨４５】

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茅臺酒曲植物乳桿菌大豆酸面團(tuán)發(fā)酵面包的營養(yǎng)與抗氧化特性[J]. 楊紫璇,張賓樂,蔣慧,馬子琳,武盟,徐巖,鄭建仙,黃衛(wèi)寧,李寧,Filip Arnaut.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2018(06)
[2]茅臺酒致香微生物對煙葉致香成分影響[J]. 王芳,歐明毅,楊超,姬厚偉,張麗,劉義萍,張慶明.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(06)
[3]HPLC測定雙向固體發(fā)酵過程中人參皂苷成分的變化[J]. 楊慧萍,李軒.  中國合理用藥探索. 2017(07)
[4]糖苷水解酶——生物轉(zhuǎn)化制備活性糖苷與苷元的有效工具[J]. 原野,胡彥波,周義發(fā).  微生物學(xué)報(bào). 2017(08)
[5]醬香型大曲中產(chǎn)蛋白酶放線菌的分離及產(chǎn)酶條件研究[J]. 于華,黃丹,陳卓,唐姣,毛祥,鄧玲,劉丹,呂開斌.  中國釀造. 2017 (02)
[6]植物源β-葡萄糖苷酶活性檢測方法學(xué)研究[J]. 金璐,王彥,薛蕓,楊嬋,閻超.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(26)
[7]基于細(xì)菌群落構(gòu)成對高溫大曲類別的判別分析[J]. 陳良強(qiáng),楊帆,王和玉,汪地強(qiáng),王莉.  釀酒科技. 2016(09)
[8]醬香型大曲中分離到的阿姆斯特丹散囊菌產(chǎn)酶產(chǎn)香特性[J]. 王曉丹,徐佳,周鴻翔,班世棟,邱樹毅.  食品科學(xué). 2016(11)
[9]高溫大曲中高產(chǎn)α-淀粉酶菌株分離鑒定及其產(chǎn)酶性能研究[J]. 魯珍,魏姜勉,諶馥佳,李恩中,郭燕芳,張建設(shè),郜勝勤.  農(nóng)業(yè)研究與應(yīng)用. 2016(02)
[10]貴州省遵義地區(qū)3個(gè)醬香型大曲細(xì)菌群落的比較分析[J]. 王曉丹,班世棟,周鴻翔,胡寶東,邱樹毅.  食品科學(xué). 2016(07)

碩士論文
[1]中草藥對甜酒曲微生物發(fā)酵性能及酒釀香氣成分研究[D]. 吳瓊燕.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]廣東客家娘酒傳統(tǒng)釀造工藝研究及主要酒曲微生物的分離和特性[D]. 陳曉蕓.南昌大學(xué) 2011



本文編號：3424601