翻譯起始對(duì)于蛋白質(zhì)合成效率至關(guān)重要。已有研究結(jié)果表明:在動(dòng)物細(xì)胞中,翻譯起始在優(yōu)化背景——Kozak序列存在時(shí)效率最高。但在植物細(xì)胞中,起始密碼子上游的核苷酸影響翻譯起始效率的細(xì)節(jié)仍有待進(jìn)行深入的研究。本研究以擬南芥（Arabidopsis thaliana）精細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料,通過對(duì)其起始密碼子AUG上游的四個(gè)熱點(diǎn)核苷酸進(jìn)行突變,評(píng)估了不同位置上的核苷酸對(duì)翻譯起始效率的影響。此外,本研究還探討了在優(yōu)化及劣化背景下,翻譯能否起始于非AUG起始密碼子處。獲得的主要結(jié)果如下:已有結(jié)果表明堿基A在起始密碼子AUG上游-1～-4中出現(xiàn)頻率最高。在起始密碼子AUG上游為劣化的背景下,本研究構(gòu)建了四個(gè)-1、-2、-3、-4位分別為堿基A的載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,獲得了各自載體對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植株,并用熒光顯微鏡對(duì)其進(jìn)行了定量觀察。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:與劣化背景相比,各個(gè)位置上的核苷酸對(duì)翻譯起始效率的提高存在不同的影響;其中,-1位對(duì)翻譯起始的效率影響最小,-2～-3位次之,-4位影響最大。在Kozak序列存在時(shí),動(dòng)物細(xì)胞中的翻譯能起始于非AUG起始密碼子處。但在植物細(xì)胞中,這一問題仍未被調(diào)查過。在起始... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 擬南芥概述
    1.2 被子植物精細(xì)胞概述
    1.3 被子植物生殖機(jī)制概述
    1.4 起始密碼子與其上下游NT序列研究簡(jiǎn)述
    1.5 翻譯機(jī)制研究概述
        1.5.1 蛋白質(zhì)翻譯過程概述
        1.5.2 翻譯起始概述
    1.6 起始密碼子AUG上下游核苷酸的偏向性研究概述
    1.7 研究意義及內(nèi)容
        1.7.1 研究意義
        1.7.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 主要試劑的配制
        2.2.2 構(gòu)建載體
        2.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.4 擬南芥花序侵染
        2.2.5 篩選陽(yáng)性植株
        2.2.6 鑒定陽(yáng)性植株
        2.2.7 對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行熒光統(tǒng)計(jì)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 -1~-4位上的熱點(diǎn)核苷酸對(duì)翻譯起始效率的影響呈現(xiàn)不同的效應(yīng)
        3.1.1 轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建
        3.1.2 陽(yáng)性農(nóng)桿菌的檢測(cè)
        3.1.3 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        3.1.4 熒光顯微鏡的觀察結(jié)果及其分析
    3.2 翻譯在優(yōu)化背景下能起始于非AUG起始密碼子處
        3.2.1 H2B中AUG密碼子的突變
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建
        3.2.3 陽(yáng)性農(nóng)桿菌的檢測(cè)
        3.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        3.2.5 熒光顯微鏡的觀察結(jié)果及其分析
    3.3 翻譯在劣化背景下不能起始于非AUG起始密碼子處
        3.3.1 轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建
        3.3.2 陽(yáng)性農(nóng)桿菌的檢測(cè)
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        3.3.4 熒光顯微鏡的觀察結(jié)果及其分析
第四章 討論
    4.1 關(guān)于AUG上游-1~-4位核苷酸對(duì)翻譯的影響
    4.2 優(yōu)化與劣化背景下非AUG起始密碼子對(duì)翻譯起始的影響
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]真核生物mRNA翻譯起始機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 鄭超星,馬小鳳,張永華,李洪杰,張根發(fā).  遺傳. 2018(08)
[3]基因表達(dá)調(diào)控的研究發(fā)展[J]. 杜靜靜,馮書風(fēng),馬晨.  今日畜牧獸醫(yī). 2018(03)
[4]模式植物擬南芥開花時(shí)間分子調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 舒黃英,郝園園,蔡慶澤,王振,朱國(guó)鵬,成善漢,周媛,汪志偉.  植物科學(xué)學(xué)報(bào). 2017(04)
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博士論文
[1]水稻的密碼子用法及起始和終止密碼子側(cè)翼序列對(duì)基因表達(dá)的影響[D]. 劉慶坡.浙江大學(xué) 2005

碩士論文
[1]質(zhì)體靶向蛋白在無質(zhì)體精細(xì)胞中的定位研究[D]. 曾紫風(fēng).西北大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3424577