發(fā)布時(shí)間：2021-09-30 14:52

　　蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)是生命科學(xué)研究領(lǐng)域的常用技術(shù)手段,嘗試將其改造成適于本科教學(xué)實(shí)踐的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,即在基礎(chǔ)性分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上開(kāi)設(shè)"免疫印跡法檢測(cè)目的基因在原核細(xì)胞中的表達(dá)"這一綜合性實(shí)驗(yàn)。根據(jù)學(xué)生的理論和操作水平以及本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)特點(diǎn),對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了優(yōu)化,并采取研討式分組教學(xué)模式,使學(xué)生能夠深入、全面、系統(tǒng)地理解和掌握蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù),提高了實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量,并有助于培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維、科學(xué)素養(yǎng)以及綜合實(shí)踐能力。 

【文章來(lái)源】：實(shí)驗(yàn)室研究與探索. 2020,39(02)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

軟件合成結(jié)果

從圖2結(jié)果可見(jiàn)，A和B泳道上出現(xiàn)GST相應(yīng)大小的清晰條帶，C和D泳道上出現(xiàn)GST-GAPDH相應(yīng)大小的清晰條帶，且誘導(dǎo)組(B和D)分別較對(duì)照組(A和C)中目的蛋白表達(dá)量有明顯增加，符合實(shí)驗(yàn)預(yù)期。但結(jié)果中尚存在2個(gè)問(wèn)題:(1)出現(xiàn)非特異性條帶;(2)沒(méi)有檢測(cè)內(nèi)參(這兩部分內(nèi)容會(huì)在后面的5.4和6.3.4中具體討論)。圖2 軟件合成結(jié)果

在目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和PAGE分析實(shí)驗(yàn)中，分別對(duì)轉(zhuǎn)化有pGEX-4T-2空載體和pGEX-4T-2/GAPDH重組質(zhì)粒的菌體進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)，全菌樣品利用SDS-PAGE結(jié)合考馬斯亮藍(lán)染色分析，結(jié)果如圖3所示。從圖3可見(jiàn)，在B泳道中31kD稍下的位置，出現(xiàn)了相對(duì)A泳道中同樣位置表達(dá)增加的蛋白條帶，理論上應(yīng)為GST蛋白;在D泳道中66.2kD稍下的位置，出現(xiàn)了相對(duì)C泳道中同樣位置表達(dá)增加的蛋白條帶，理論上應(yīng)為GST-GAPDH蛋白。但該方法只是根據(jù)蛋白分子量大小進(jìn)行判斷，并不具有特異性，即使表達(dá)量增加的蛋白大小符合預(yù)期，也無(wú)法完全確定該蛋白就是目的蛋白，這就引發(fā)了學(xué)生對(duì)結(jié)果的質(zhì)疑。

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本文編號(hào)：3416093